算力巢使用教程
① 請問閃光燈攝影中,如何使用蜂巢,哪裡有詳細一些的教程
看看這個牛人自製蜂巢拍的效果就明白了,主要是束光作用,似乎沒有什麼專用教程。
http://www.tianya.cn/publicforum/content/numtechnoloy/1/94735.shtml
② 人人礦和比特小鹿那個挖礦平台靠譜
人人礦品牌更老,投資方實力更好,在全球有礦場,比特小鹿風險更大
③ 加藤鷹金手指教程

加藤鷹—巢吹指法
1、指腹朝下伸長接觸榜首觸點
榜首觸點是子宮口凸起的下方(背部方位)。在她仰躺時,你的食指和中指指腹朝下伸進音盜,盡可能伸長,應該就接觸得到。最早先按壓這個觸點。
當女人這個方位受影響時,會逐漸發作快感,並分泌愛液。特別留意:這個觸點略微靠外側一點,便是一面之隔的直腸,所以施以按壓影響時,若不小心略微靠外側,很多有便秘困擾的女人因為受影響有時會發作便意,必需特別小心。
2、指腹朝上往回接觸第二觸點
為了探索下一個觸點,接下來把指腹朝上。在子宮口再往外一點的方位,用手指接觸時會發現凹陷部位,這里是第二觸點。
3、指腹朝上再往回接觸第三觸點
第三觸點位於恥骨裡面一點的方位。手指從第二觸點往自身的標的目的移動時,能夠摸到一處軟軟象肉團般的部位,以手指剝削這個方位,手指應該能碰著恥骨內側,你會感應手指有點卡住。
女人潮吹的方法—潮吹的方法,並不是以手指剝削這三個點,而是以彎曲的手指分別在三個觸點往自身的方向摳動。頻頻在這個三個點加以影響。手指往復摳動第二、第三觸點就會發作愛液,然後按壓第三觸點更挨近自身的方位,就會發作潮吹。
兩點刺激法
所謂兩點刺激法,就是要同時刺激G點和子宮頸口。👉👉👉進階系列—高巢開關
在塗抹潤滑液或高巢液以後,把食指和中指交疊,插入陰深處,然後再慢慢地將手指呈V字形、縱向打開,通過這個動作將陰內壁變得柔軟放鬆。
然後再將中指伸直、食指彎曲——前者用來刺激子宮頸口、後者用來勾住G點隆起的部位,接著以前後推進、縮起手肘的反復移動方式,來運動中指進行活塞運動,與此同時充分刺激G點。
撓抓法
在使用抓撓法的時候,男方需要把食指和中指,或者中指和無名指,兩根手指一期伸入陰內部,尋找G點。G點一般會位於陰內部三到五公分的前壁上,當然每個女生體質不一樣,可能會有所區別。
手指伸入之後找到一個突起/彎曲的位置,有的人觸感像豆子般大小、有的人觸感像歪斜狀的皺紋,有的人觸感像柔軟的凹凸狀——觸感明顯和其它部位不太一樣的地方,就是G點所在的位置。
將兩個手指彎曲起來、指腹抵住這個部位後方凹下去的地方,然後用一種向外撓的方式,保持手指彎起的角度,進行活塞運動。
由於僅用兩根手指來刺激,不用擔心會刺激到陰內壁,而且只需固定手腕和手指的角度做活塞運動,對男方來說也非常輕松。
不過要注意的一點就是,在使用這個手勢的時候,要小心速度上的操控,不要讓女票感覺到疼痛,如果順利刺激到要點、速度節奏又剛好適中,女方的反應會變得很激烈,潮chui也就很快回到來啦!
G點壓迫法
如果擔心自己的手指會傷害到女生的陰內壁,那就可以嘗試一下這個體位哦~
在使用這個方法的時候,需要將食指和中指、或者中指和無名指插入陰。
按照上一個方法那樣尋找到G點,然後將指腹按在G點上。在使用這個手勢的時候,男方的手腕會輕松很多,而且因為一直只用指腹進行按壓,也不用擔心會傷害到女票的內壁肌膚。
不要松開兩支手指,讓它一直觸碰著G點,在陰道內按壓陰D的背面,一開始輕柔一些、然後慢慢增強力道,在最終階段可以將女票的腰抬起來繼續進行。
如果想讓刺激更加富有變化一些,也可以對女方進行畫圈一樣的運動或者上下左右進行摩擦,對女生來說會非常享受的!
④ 求oligo 7軟體使用說明或者教程。
Oligo使用方法介紹
作為目前最好、最專業的引物設計軟體,Oligo的功能很強,在這里我們介紹它的一些主要功能:如:普通引物對的搜索、測序引物的設計、雜交探針的設計以及評估引物對質量等等。
在正式進行引物設計前,我們首先面臨的一個任務就是向Oligo程序導入模板序列,根據不同的實驗情況,導入模板有三種方法:
1, 直接用鍵盤輸入:
a, 點擊file菜單中的New Sequence 浮動命令,或直接點擊工具欄中的New Sequence命令,進入序列展示窗口;
b, 此時即可鍵入DNA序列;
c, 如果需要的話,Oligo提供鹼基回放功能,在邊鍵入時邊讀出鹼基,防止輸入錯誤。點擊Edit菜單中的「Readback on」即可。
2, 利用復制和粘貼:當我們序列已經作為TXT文件存在或其它oligo不能直接open的文件格式,如word文件.html格式,這個功能就顯得很有用了。在相應文件中復制序列後在序列展示窗口粘貼,oligo會自動去除非鹼基字元。當序列輸入或粘貼完成後,點擊Accept/Discard菜單中的Accept浮動命令,即可進入引物設計模式。
3, 如果序列已經保存為Seq格式或者FASTA,GenBank格式時,oligo就可以直接打開序列文件。
點擊File菜單中的「Open」浮動命令,找到所需文件,打開即可。
進入引物設計模式後,oligo一般會彈出三個窗口,分別是6-鹼基頻率窗口,鹼基退火溫度窗口以及序列內部鹼基穩定性窗口,其中的退火溫度窗口是我們引物設計的主窗口,其它的兩個窗口則在設計過程中起輔助作用,比如6-鹼基頻率窗口可以使我們很直觀地看到所設計引物在相應物種基因組中的出現頻率,如果我們的模板是基因組DNA或混合DNA時,該信息就顯得有用了,而內部穩定性窗口則可以顯示引物的5』端穩定性是否稍高於3』端等。
一,普通引物對的搜索:
以Mouse 4E(cDNA序列)為例。我們的目的是以Mouse 4E(2361 bp)為模板,設計一對引物來擴增出600-800bp長的PCR產物。
1,點擊「Search「菜單中的」For Primers and Probes「命令,進入引物搜索對話框;
2,由於我們要設計的是一對PCR引物,因此正、負鏈的復選框都要選上,同時選上Compatible pairs。
在Oligo默認的狀態下,對此引物對的要求有:a,無二聚體;b,3』端高度特異,GC含量有限定,d,去除錯誤引發引物等。
3,剩下的工作是確定上、下游引物的位置及PCR產物的長度以及引物設計參數。
①單擊:「search Ranges」按鈕,彈出「Search Ranges」對話框。輸入上游引物的范圍:1-2000,下游引物的位置:100-2300;PCR產物的長度600-800bp。
②單擊「Paramaters」按鈕進入「Search Parameters」對話框,對話框種分三個活頁,分別是:不同設定,參數以及更多參數。
③在「普通設定」窗口,為我們提供了對引物非常直觀的設定方法,從高到低分六個等級,最後還有一個用戶定製選項。
④當我們對引物的各種參數的含義及應該設定多大值並不是特別清楚時,就可以直接設定Very high/High等來完成對引物設計參數的設定。
⑤當我們選中「Automatically Change String」後,Oligo會在引物搜索過程中:如果在高等級設定中無法找到引物對時自動降低一個定級來進行搜索,知道找到引物對。在設計反向PCR引物對時,就選中「Inverse PCR」復選框。
⑥我們還可以讓引物的長度可以改變,以適應設定的Tm值或PE?(Prime Effitions,引發效率)。也可以限定所選引物對的最大數目。
⑦在「Parameters」窗口中,實際上需要我們改動的只有引物的長度,根據試驗的要求作相應的改變,如23nt。其他參數就使用Oligo的默認值,一般無需改變。在「More Parameters「窗口中,一般也無需作任何改變,直接用Oligo的默認值。
4,點擊「確認」-「Ok」進入搜索窗口,再次單擊「OK」後,Oligo自動完成引物對的搜索,並出現一個搜索結果窗口。顯示出得到的引物對數目。
5,點擊「Ok」,出現「PrimerPairs」窗口,在窗口中列出了7對引物的簡單信息,引物位置,產物長度,最佳退火溫度及GC含量。單擊「Sort」按鈕,可以按產物長度,最佳退火溫度及GC含量從小到大或從大到小的順序排列。
6,點擊任意一對引物,在旁邊馬上彈出一個叫「PCR」的窗口,在窗口中我們可以看到這對引物在模板中的大概位置,最佳退火溫度(該溫度可以直接應用於我們實際PCR中的第二步退火)。另外還有引物的Tm值,GC含量,引發效率,同時還計算出了產物的Tm值於引物Tm值的差異以及引物間Tm值的差異。一般我們盡量保持前者在20度以內,後者在5-6度以內。點擊不同的引物對時,PCR窗口內容同時作相應的改變。
7,要想了解引物的詳細信息,如二聚體,發卡結構形成情況、組成、Tm值和錯誤引發位點等,這時只需點擊「Analyze」菜單中的相應命令,就可以分別得到相關信息。例如點擊「Duplex Formation」,我們就可以得到上游引物間,下游引物間及上下游引物間形成二聚體的情況。同理,「Hairpin Formation」,「Composition and Tm」,「False Priming Sites」等命令就可以顯示出相關信息。所有這些分析的結果都有助於我們從Oligo搜索得到的多對引物中選擇最佳的引物對。
需要說明的是,1,如果一次搜索得到的引物對太多時,我們可以適當提高選定的條件和規定更合適的搜索范圍來減少引物對數;2,引物一般盡量不要在3』端或是離3』端太近的位置形成二聚體,同時二聚體的自有能絕對值盡量小於10;3,對於錯誤引發,在普通PCR中,如果引發效率在160 points以上時,就可能出現雜帶,在測序反應中,錯誤引發效率則應該嚴格控制在120 points以下。
8,Oligo中每對引物的詳細信息可以直接導出為一個文本文件:
首先點擊「File」菜單中的「Print/Save Options」,在出現的對話框中的普通設定選中「Selected」;在「Analyze I」中選擇需要保存的信息,在「Analyze II」中選中PCR。
單擊確定按鈕退出,這時再次點擊「File」菜單,Save浮動命令中的「Data Save as」,選擇路徑及文件名即可。
二,測序引物的設計:
在oligo中,測序引物設計過程與普通引物設計大部分都很相似。
還是以Mouse 4E為例,假如我們要在600-800bp的位置設計一條測序引物。
Open-Search
在「Search」窗口中,選中「Sequece Primer」,同時去除負鏈Search的選中
在「Search Range」窗口,輸入正鏈的600-800bp
在「Parameters」中選定 very high ,引物長度改為18bp
結果得到11條測序引物,與普通引物同理,根據其詳細信息就可以挑選到一條最佳的測序引物。
三,探針的設計:
探針的設計與測序引物設計基本相同,只需使「Search」窗口的探針設計選中,改變探針的長度就可以。
四,評估引物對:
我們在各種文獻中查到的引物,如果直接進行PCR,往往很難重復別人的實驗結果。這時就想到,是不是引物的質量有問題?能不能用軟體來對這些問題引物進行一些分析呢?答案時肯定的。
1,點擊File菜單中的New命令;
2,在「Edit New Sequence」的窗口中用鍵盤輸入上游引物;
3,如果該引物的首位置不是1的話,可以在「Edit」窗口中輸入新的5』端位置數字,如20;
4,點擊Accept/Discard菜單的Accept命令;
5,如果引物序列長度不同於當前的引物的話,可以從「Change」菜單中改變當前的引物長度;
6,選取當前序列為上游引物(點擊「upper」按鈕);
7,從Edit菜單中選取「Lower Primer」命令,在Edit Lower窗口中輸入下游引物的序列;
8,在Edit窗口的上角處,輸入相應的5』位置;
9,選取「Accept and Quit」命令;
如果想讓程序給出最佳退火溫度,在此時的對話框中輸入PCR產物的長度以及GC含量所佔百分比,一般哺乳動物的cDNA序列中GC大約佔44%。
10,點擊OK就可以在「Analyze」菜單中完成各種分析了。
心得
yvette wrote:
對於作PCR的來說,最難的莫過於設計引物了,理論現在已經很多了,但是真正實踐起來是要付出一定的心智的,記得曾經看到某一位主任說他設計了上千對引物,從沒有失手的時候,真是讓我佩服得五體投地。
最近看了一下OLIGO6.0的使用說明,英文的,感覺有很多地方還是講得不很明白,比如 Nested primers design 及 multiplex PCR Primer design.
下面我先來講講普通的利用OLIGO 設計引物的方法吧:
1 從文件菜單打開模板序列,當然,不是隨便什麼序列都可以打開的,要有特定的格式,一般擴展名為 *.seq的序列可以直接打開,或者就從文件菜單選擇new sequence打開一個空窗口,然後利用復制/粘貼也可以導入模板序列,或者直接在該窗口中寫,然後要打開文件菜單旁邊的 accept 菜單,選accept就可以了;這時候有三個窗口,重疊在一起,很不方便看,可以從window菜單選Tile,這樣,三個窗口就平行排列了。
2 從search菜單選primers and probes,打開了引物搜索窗
3 點黑PCR下面的compatible pairs 前面的小圓孔
4 在oligonucleotide with GC clamp 及 Eliminate false priming 前的小方格里打上勾
5 如果在PCR中可能存在其他的模板,要想使所設計的引物與該模板不會形成錯配,可在 And continue above search in other files 的條目前方格中打勾,這時會出現一個新的 select files窗,導入可能會形成錯配的模板序列。點OK
6 點Search ranges按鈕,輸入你想要的上游和下游引物在模板序列上的區間及想要的產物的長度,點OK
7 點parameters 即引物參數按鈕,一般將搜索嚴謹性設為high,如果搜不到,再降低嚴謹性,另外,在adjust length to match Tm's前的方格中打勾。點OK
8 點擊OK開始自動搜索
9 搜索完成後,在search status窗口的下部選show:primer primers, 點OK
10 得到的引物可以根據位置、長度、退火溫度及GC含量進行排序(sort)
11 點擊您所想要的就打開了一個窗口顯示引物的位置、退貨溫度、GC含量、PE(Priming efficiency 引發效率)等。
12 從文件菜單點擊"New Database" ,然後從import菜單點擊 upper primer 和lower primer 就可以將您所需要的上下游引物序列導入到資料庫中,至於如何生成引物報告單我就不甚了了,感覺這個功能不如primer premier好使。還希望知道如何使用的兄弟不吝賜教一下叻。
Nested Primer pairs Search
與上述自動搜索差不多,有一下幾點不同:
1 打開search菜單後,不要選定 「 And continue above search in other files 」
2 打開parameters菜單後,注意不要選定「 Inverse PCR」 框 ,同樣選定「adjust length to match Tm's」 框
3 開始搜索後得到結果顯示在「Primer pairs"窗口中,從analyze菜單中 選定multiplexing,得到一個顯示所有搜索到的引物在模板上的位置的窗口,直接在該窗口中選擇您所要的引物,在您所要的引物的小方塊上點擊一下,positive strand primer 選定後就從紅色變成了綠色,negative strand primer 選定後就從藍色變成了綠色。先選擇巢式PCR的一對外引物,然後選擇一對內引物,選定後點擊pairs就打開了顯示您所選定引物的窗口
4 從文件菜單點擊"New Database" ,然後從import菜單點擊multiplexed primers就將您所選定的引物導入到一個資料庫中,保存。
好像從export 菜單可以生成order form, 但是我實在是太木了,這都大功告成了,到了最後又歇菜了。
還有很重要的功能如搜尋 consensus primer pair 和搜尋 unique primer pair 來擴增同源性的模板,比如後一個應該就是設計擴增許多同源性很高的序列的保守區吧,我以為我已經找到了尚方寶劍了,可是三條序列試了一下,這三條序列經過 multiple align後有很長一段是保守的,您猜怎麼著,等了好幾分鍾,結果沒有找到,我又用十條序列,乾脆就死機了,可能這一功能需要很大的內存才能使用。也許是我還沒有找到竅門,有知道的還請教教我。
⑤ spss中如何使用巢氏方差分析,最好有教程
可以做重復測量方差分析,教程有很多的
⑥ 巢用五筆怎麼打
巢五筆:
VJSU
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巢_網路漢語
[拼音] [cháo]
[釋義] 1.鳥搭的窩,亦指蜂、蟻等動物的窩;借指敵人或盜賊的藏身之所:鳥~。蜂~。~窟。匪~。~穴。 2.姓。
