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❶ 做MTT時用的三聯液配方是SDS10g，異丁醇5ml，10M HCl 0.1ml，沒有異丁醇的話，用異丙醇行嗎急！！！

應該明確實驗前

1。選擇適當濃度的細胞接種。的內貼壁細胞的96孔培養板中，在正常情況下，包括約105個細胞。但由於該地區有很大的不同，在不同的細胞附著在MTT法，預實驗檢測其貼壁率，倍增時間以及種子細胞的生長曲線的條件下，確定測試孔接種細胞數和溫育時間，為了確保列車終止誘導的細胞過滿。因此，在為了保證MTT晶體形成的細胞數成比例呈線性關系。否則，細胞的數目的敏感性降低太多，太少沒有觀察到差異。
2。集合中的葯物濃度。請務必看到更多的文獻，參考其他人的結果，然後給出一個比較大的范圍內的第一次篩選。根據自己的篩選狹窄的濃度和時間范圍再細篩的結果。記住！否則，可能會使用的時間和濃度的葯物的有效濃度和時間。

3。設置的時間點。 OD值嗎？在不同的時間點，輸入Excel工作表中，並最終在不同時間點的抑制率變化的測量，繪制圖形的變化，當曲線變得平坦（高原）的時間點，應使用最好時間點（因為這個時候的細胞增殖抑制最明顯的表現）。

4。孵化時間。 200UL 10 4-5電源增殖細胞的培養液中是難以維持68H，營養不足，細胞增殖階段逐漸趨向G0期往往仍影響的結果，我們在48小時介質中被改變了。

5.MTT法只能測定相對細胞數和相對活力，不能絕對數量測定細胞。做MTT，盡量無菌操作，因為細菌也可以導致MTT比色OD值增加。

6。理論未必全是。要根據自己的實際情況進行調整。

實驗對照孔加葯孔孔應設置為零。零孔加培養基，MTT，二甲亞碸。控制井和計量孔必須加細胞培養基中，MTT法，二甲亞碸，和不同的是添??加到媒體控制井，而溶解該葯物中加入不同濃度的葯物的給葯組。

8。避免血清干涉。含15％FBS培養基中培養的細胞中時，高血清物質會影響試驗井的光吸收值。將測試的靈敏度測試增加背景。因此，它通常是優選的是小於10％胎牛血清的培養液中。著色後，盡量吸凈培養孔殘余的培養基。

實驗步驟

貼壁細胞：

1。上收集的細胞數，調整濃度的細胞懸浮液加入到每個孔100ul鋪板所測試的細胞調節至密度為1000-10000孔（邊緣？孔填充用無菌PBS中）。

2.5％CO2，37℃孵育，直到細胞單層覆蓋的底部的孔（96 - 孔平底板），添加葯物的濃度梯度，在原則上，細胞的粘附給葯或兩小時或半天的時間，但我們常在前一天下午鋪板第二天早上劑量。一般為5-7梯度，每孔品100μl，位於3-5井。建議設5，否則難以體現

3.5％的CO2，並在37°C孵育16-48小時，倒置顯微鏡下觀察到的真實情況。

4。添加到每個的阱20ulMTT溶液（5mg/mL的，或0.5％的MTT），並培養4小時。用MTT反應的葯物可以先離心丟棄培養基，用PBS仔細洗滌2-3次，然後添加到培養基中含有的MTT。

5。終止的文化，並認真吸收孔培養基。

6每孔加入150ul二甲亞碸，設置振動篩在低速振盪10分鍾的晶體完全溶解。在OD490nm的酶聯免疫吸附檢測器測量的每個孔的吸光值。

7。同時置零孔（培養基，MTT，二甲亞碸），對照孔（細胞，相同濃度的葯物溶出介質，培養基，MTT法，二甲亞碸）

懸浮細胞：

1）收集對數生長期細胞，調節細胞懸液濃度為1×106互補序列①1640（無血清）介質40ul;②加放線菌素D（有毒）10UL稀釋培養基升的？克/毫升，需要預先測試，以找到最佳稀釋,1:10-1：20）;③需要檢測對象10UL;④細胞懸浮液50μl（即，5×104cell /孔）的100ul加入96 - 孔板（邊緣？孔填充用無菌水）。建立控制每塊板（加100（原液100 1640）。
2）在37℃，5％CO2孵育16-48小時，並在倒置顯微鏡下觀察。

3）每孔加入10微升MTT溶液（5毫克/毫升，或0.5％的MTT），並培養4 h。 （懸浮細胞推薦WST-1，培養4小時後可以直接跳到步驟4），直接酶聯免疫吸附測定的OD570nm 630nm的校準測量每孔的吸光度值）

4）離心（ 1000轉x10min）仔細吸掉上清液，每孔加入100微升二甲亞碸中，設置搖動器在低速振盪10分鍾，完全溶解的結晶。在酶聯免疫吸附測定OD570nm（630nm的校準）測量的吸光度值？為每個孔。

5）設置零孔（培養基，MTT，二甲基亞碸）對照孔（細胞，相同濃度的葯物溶出介質中，在培養基中，MTT法，二甲亞碸），每個設置的3個井。

MTT准備

MTT通常情況下，最好使用4℃避光過濾器後兩周內，或配製成20,10,5保存在 - 20度長期保存，避免反復凍融，最好小劑量包裝，用黑袋或黑紙，鋁箔及包裝暗，避免分解。我一般都把MTT粉包裝EP管，現有的服務直接添加到培養板，不需要一下子有這么多的，特別是當它絕對MTT變為灰綠色不能重復使用。

MTT致癌性，使用時要小心的那種透明薄膜手套的最佳條件。被稱為MTT需要無菌，MTT細菌，是非常敏感的;到96孔板一個PBS 黑暗中額外的時間並不重要，畢竟，時間是短暫的，你不用擔心時，你可以把關了燈手術台。

制備MTT;溶解，還配備用鹽水在60℃水浴中進行增溶。

PBS配方：

氯化鈉8克

KCL0.2克

磷酸氫二鈉1.44克

> KH2PO40.24克

調pH值7.4

給定容量1L

細胞接種（平台）

細胞30代不要使用，因為狀態並不好，培養板中使用一個很好的（最好是進口板），壞板或重復使用的板僅做預實驗。

最佳接種密度計算出來的按照預實驗接種後，細胞生長抑制率（或增值率），因為關於OD值嗎？細胞密度10000/ml的測量時間間隔呈直線關系最好的，最可靠的結果。如果店鋪是太稀細胞的殺傷不會很明顯，可能都過於密集的細胞凋亡，細胞生長速度過快的營養是不夠的，最後導致死亡。過密或過少的細胞，細胞增殖將是過快或過慢，差線性關系，其增值率。因此，MTT細胞的密度使用更10000/ml的，100ul /孔。

細胞密度的特點，不同的細胞，如果細胞刺激作用的葯物，那麼細胞濃度為小點，如果你這樣做對細胞有抑製作用的葯物，然後取更大一點細胞濃度，因此，與對照的差異，該數據是更好。懸浮細胞的各孔中的細胞數達到105，貼壁細胞103-104。

其他的聲音：

第一個單元格播種密度不能太一般每孔1000就足夠了，我想，寧少勿多。特別是對腫瘤細胞。 10000 /孔是太高，所以，即使葯物，MTT法不能表達的最佳點板濃度在4000-5000 /孔，太少的SD值。

2.MTT本身是一個相當厚的實驗約10％，增殖率的波動也就不足為奇了。特別是新手，有20％的波動也是常見的，因此它可能是由於技術原因，特別是種板技術必須過關的。

我MTT法檢測腫瘤細胞，這些細胞長一開始我100000/ML濃度的疫苗接種，結果細胞長的太滿，結果梯度也沒有線性關系。調整後的濃度使用了40000?80000/ML濃度MTT法，做的好點的是60000?70000/ML組的濃度。 40000 / M的基團的濃度，是因為這些細胞是以下，葯物作用或只是沒有一個有良好的線性關系的梯度，根據細胞生長速度，以及葯物的特性（的時間依賴關系，並的濃度依賴性的葯物），以確定培養的時間是48小時或72小時。

一定要注意避免細胞的細胞懸液混合沉澱下來，在每個孔中的細胞數的范圍，收到了一些必要再混合均勻。移液管操作要熟練，避免人為錯誤。雖然更准確比移液管移液管，但如果操作不熟悉，CV將在8％左右。此外，吹了太多的時間，也影響細胞活力。因此，熟練的鞋，盡快在黑板上。

讓我談談我的一點經驗：

1。狗新花樣不能太多懸掛的總的3-4倍，吸液管液量可能會比較容易混合。 10毫升優選地安裝的懸浮液中3?4毫升：該懸浮液的離心管太少容易吹氣泡，懸浮液的特定也是不容易被風吹到單細胞懸浮液。 。 。

移液管移液管最好在1毫升左右：吸入過量的液體，看起來液管餘下的數，如吹打容易起泡吸管吸了很多量過小，強度移液是不夠的，將移液不均勻。如果吸液量1毫升稻草，總液量，在約5ml的好處

吸氣時，懸掛在底部，然後抬起，但吹了下來，不留液體的表面，否則容易一拳砸的氣泡。

4。狗新花樣，你可以數100吹打均勻（前約30-50倍的吹打加細胞基本上差不多均勻。加細胞分別接種2孔反復移液管移液3次3次後，他們把他們的槍掛在5秒內的細胞懸液，然後劃出一定的速度懸浮液）。

用吸頭，每孔加入到細胞中不要太猛了，否則你會發現細胞在想要添加的移液管尖中的孔的底部的勢頭由於收集了一堆，一般在這種不均勻的分散液接觸抑制周圍的孔的底部的中心，影響細胞的生長。因此，速度不能太快，也不能太慢。我習慣了增加每塊板水平握手後，左一個右其次，移動的答復中，細胞可以均勻地分散這些。 （鋪板技術是MTT法的關鍵，也是基礎，我們必須練好，一旦學生振盪器和混合與旋渦細胞，最後一個單元格都死了，使用這種方法是不建議混合細胞
BR />加入MTT

個人認為MTT最關鍵的是你的手機號碼和MTT適當的比例補充說，真正起作用的，和具體的細胞數量之間的關系和真正的工作真的不好確定，我認為MTT支付超過最低量好一些

MTT各種報告的MTT，一般是過度10UL不夠的，如果你不使用96孔板， MTT按照10％的比例超過100ul培養基地。，加入MTT振盪讓MTT和媒介組合，但這個應該不大。

有個別的孔，如立即加入MTT變藍黑色，污染的可能性是很大的，另一個在前面的MTT攤薄細胞仍然需要適當的方法來過濾消毒。可以加MTT前顯微鏡下才能看到，如果有一個孔染菌，染菌孔附近往往是 />
血清白蛋白對大多數的葯物的組合的效果，它是可能的分開的葯物和MTT一起看到的將反應MTT法不能反應，不必除去水培的含有葯物的溶液，直接加。

上層清液

爭：

1加DMSO液體吸掉，但培養液，紫色晶體吸收之前，該第一的平板離心機，2000轉，5分鍾，然後吸掉上清液（如果是懸浮細胞，此方法建議在2500rpm 10分鍾離心分離的懸浮細胞，並做MTT的最好的圓底96孔板中的96 - 孔板，注意不要結晶顆粒吸掉上層清液後，建議每孔吸出150-160ul）

2。每次我都會MTT和孵育4小時，然後離心1000G 5分鍾槍小心吸去上清液，或將一小部分藍水晶吸出，所以還是建議翻轉顛倒了！

另外，我們可以直接在板翻轉顛倒（墊層濾紙）2-3倍的方式「吸」是不容易使細胞脫離出來。輕拍，或傾斜一點幫助吸液管，紫色晶體幾乎沒有可見的列，但你自己的細胞貼壁的前提下，比較監獄，半貼壁生長的細胞容易脫落。葯物作用時間長，陰性對照組的細胞可能是由於過多離開MTT加入後形成的結晶漂起來，所以不能直接排放

MTT，這一步必須小心，不要使用貼在牆上倒立的方式，因為是不強大的單元格將被倒掉，從而影響OD值嗎？懸浮細胞，不拍打上清液。 ，離心後，不拍打這種方法殺了人。

5。加入MTT反應完成後3-4h後，在96孔板的作用是從孵化器中刪除要輕柔，避免振盪結晶，它溜了。您可以嘗試在96孔板傾斜30度角，然後的槍口慢慢吸一些細胞排球吸，有些人會用移液器吸頭吸病人，槍口下的強度和方向，以確保每個孔是不要讓吸頭接觸到孔??底，一次後傾斜孔板，不反復傾斜的平直，這樣也會使晶體脫落。

6。移液與醫用注射器登上教訓針對角線的經驗教訓沿著培養基MTT的牆壁，好像我1毫升針小心地吸可靠的比其他的方法，一般不吸紫色晶體。

避免上層清液和改進的方法

一般容易發現，即使貼壁細胞在96孔板離心式離心機，的MTT溶解在DMSO，結果是沒有好，不能得到預期的結果重復性差。

解決方法1：以下文獻方法：周建軍等，評價抗癌物質活性的改良MTT法，中國期刊的葯品，1993,24（10）:455-457 BR />
具體方法如下：

三溶解液：10％SDS，溶於蒸餾水中，5％異0.012mol/LHCL的。

三聯溶解解決方案：SDS10g，異丁醇5毫升的10M鹽酸0.1毫升雙蒸水溶解配成100mL溶液

操作：細胞懸浮在培養板中，加一定密度的解決方案，90ul /孔;管理，然後（懸浮細胞）在同一時間或4h後（貼壁細胞）通過加入不同濃度的葯物10UL /空穴，位於三井。另外，每塊板另一個沒有零孔（僅添加到培養基中，無細胞和葯物）培養2d後加入MTT溶液20ul /孔，和文化繼續4小時，然後加入上述的三重液體品100μl/孔，在37℃靜置過夜，用酶測定的標准儀器孔A570值？

優點：簡化操作，提高了可靠性。

解決方法2：日本同事有一個新的試劑CCK-8試劑，CCK -8試劑可用於簡單和准確的細胞的增殖和毒性分析其基本原理是：含有的試劑WST-8 [化學名稱：2 - （2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基） - 3 - （4 - 硝基苯基）-5 - （2,4 - 二磺酸苯基）-2H-四唑單鈉鹽]，這在電子載體1 - 甲氧基-5 - 甲基硫酸鹽吩嗪二甲基（1 - 甲氧基PMS）線粒體脫氫酶的作用降低的高度水溶性的黃色染料（甲臢染料）A的產生與活細胞的數目的數目成正比，所以此功能可以用於直接的細胞增殖和毒性分析CCK-8試劑已預先裝入的細胞增殖和毒性分析所需的組件，未經稀釋，然後緩沖區或中等，沒有任何放射性同位素和有機溶劑的CCK-8試劑。因此，沒有特別的技能，你可以讓每一個用戶准確，可重復的實驗結果。

★優勢 / a>
1，簡單的一個步驟的結果

2，節省時間，不需要預制開放

3，安全沒有必要放射性同位素，有機溶劑
>
4，迅速消除溶解除沉操作

5，高靈敏度，靈敏度比MTT

6，重復性幾個不錯的步驟，無損，准確

是比較昂貴的，如果充分的資金，這是件好事。

★細胞增殖實驗使用：

1，接種細胞懸液100μL96孔板，預先放置在37℃，在5％CO 2培養箱培養。

2在每個孔中引入CCK-8試劑10μl的。

培養板在孵化器1-4個小時。

4，測定吸光度在450nm波長為600nm或600nm的波長參考。

解決方法3：使用MTS / a>
解決方案4：

加入DMSO

放棄孔內液體，最好不要更換相同數量的實驗DMSO加入DMSO清潔，直接加入到DMSO首先，除去上清液，沉澱將難溶於培養基顏色檢測測量時，將影響最終的結果，但前提是不能使細胞與吸掉，因為錯誤是遠大於培養基中沒有放棄一個干凈的錯誤，所以，以確保細胞的前提下，盡可能不虹??吸的培養液虹吸如果培養溶液不是一次性清潔空白孔應留下的培養液相同量的，所以檢測時的培養液的影響，可以除去盡可能多的DMSO的量為100ul或150ul

1。添加的DMSO後使用振盪器輕輕振搖5 - 10分鍾時間控制密切越好，放置時間長了會影響結果，該值將過大，其結果是不可靠的。
2。後加入DMSO排球反復抽吸溶，盡快解散後檢測。實驗孔是小的，它建議，這種方法，因為其更好的效果比振盪溶解。

3，或者在37度把培養箱中培養15分鍾，溶解結晶

振盪，讓甲溶解，以便更好地測量的吸光度振盪96孔板具體地說，振盪器，目的：鑿孔泡沫。氣泡的存在下，由於其光的反射和折射效果（原則讀者是通過特定波長的測量樣品中的特定物質樣品的吸光度推測）的濃度，會導致結果抵消了測定OD值嗎？

至於測定給出的波長是不同的顏色溶液，DMSO，溶解紫（紅）色，490nm處的最大吸收值，而在ATCC的MTT試劑盒使用的是不DMSO，它的測定波長為570（在ELISA實驗，OPD為底物測得的波長為492，選擇的TMB底物溶液是450）; SDS和酸化異丙醇選擇570nm的，並建議作為參照波長等於655nm。

DMSO溶解經過10分鍾內測，越放顏色越深，SDS溶解液測定吸光值，其值在三天內保持不變。

細胞密度太大測定吸光度細胞密度過大，吸光率也小;另一個細胞狀態的關系，細胞狀態不好的吸光度值低;少量的細胞，或短的時間內培養的OD值會比較低。每個洞之間的差異尤為明顯說明可能存在的污染，空白孔的OD值過高，很可能是細菌的污染。

井直接OD值差別一般應在0.1-0.15不同的考慮：1。種子細胞不統一或疫苗接種時，應保證每一個孔一般為1000-10000元以及細胞細胞計數，加入細胞懸液培養基中定容，輕輕吹打幾次，使細胞均勻分布的，因此，這是更好的不是直接加入預定體積的細胞懸浮液，接種疫苗應加入含有血清的介質2。粘附時間:18-24小時，如果沒有，而不是懸浮細胞可虹吸
/>一般，為了實驗的精度，和各濃度可提供5-6井可以最終的統計，可以除去的最大值和最小值，或荒謬的值？其特徵在於，所述數據被除去，這些離譜數字細胞污染，是否在培養過程中細胞的死亡，文化，蒸發過度的附加組件的MTT溶液是不準確的，在5％二氧化碳培養箱中培養，在37°C，無論是時間常數（1-4小時）有密切的關系，當然的OD值的測定儀器狀態是正常的，是非常重要的！（一般熱身20分鍾）。

MTT吸光度誤差在0.2至0.8之間。分析化學相關的蘭伯特Beer定律，朗伯 - 比爾定律骨密度分析偏差，通常在標准曲線的情況下是不是線性的，尤其是吸光物質的濃度較高時，可以清楚地看出通過原點到濃度軸彎曲的現象（吸光度軸彎曲）情況稱為朗伯 - 比爾定律的偏離定量的曲線的彎曲部，將產生較大的誤差。骨密度分析儀測量不準確的誤差的主要來源。光度計具有一定程度的測量誤差。這些錯誤可以是來自於光源不穩定，變化的實驗條件下偶然不準確的讀數。

光度計透射的標尺刻度是均勻的。吸光度標尺刻度不均勻。波動對傳動比一定值時，讀出的相同的工具;吸光度讀數波動不再是一個固定的值。吸收更大的錯誤讀數波動而引起的透光率或大或小，濃度測量誤差大，更大的吸光度，最好的光度當選的吸光度讀數不下降在中間規模的要被測量的透射率T在15％至65％的范圍內的溶液，或在兩端時的吸光度，A是在0.2?0.8之間，為了確保較小的相對誤差的甲= 0.434（或透射比T = 36.8％），最小相對誤差的測量。

其他的聲音：

最好的570nm波長過濾器，MTT吸光度測量。在此波長的峰值，在其他詞語具有大致490nm處與其他波長的高靈敏度，但我的經驗的靈敏度降低了一半。
2 BIO-TEK，我們使用ELx800，一般值2是可靠的，如果該值是要考慮它是否是一個錯誤在實驗過程中，我已經看到了花園的一些職位OD值可能與活細胞數在0.2-1.2范圍內具有良好的線性關系，復孔太大的區別，但OD值在0.3-0.9范圍內的好，如果你的OD值？此范圍之外的，做實驗，細胞計數可能不適合，你應該調整細胞的數量。邊緣效應
/>

孔一般只有空白，非培養細胞，或這四條線中的數據將是高或低的由圓圈包圍的96孔板，96孔板的培養箱中因為缺乏濕度，和孵化器具有一定的溫度，由於溫度梯度，使得邊緣的孔蒸發更快，導致的各個組成部分中的培養基中的濃度增加，導致這種現象的不同的細胞狀態，它是必要的，以保證濕度的培養箱中，並以降低的頻率和持續時間的開關培養箱。方法：所有周圍的圓形孔的孔板，「否」，的影響是非常大的，最外面的圓必須添加水，PBS或培養液中，只要你能防止水分蒸發。

如何計算的IC50後的寇方法：

（1）lgIC50 = XM-I（P- （3-PM-PN）/ 4）

XM：LG的最大劑量

I：LG（最大劑量/相鄰劑量）

P ：正反應速率和

PM：最大的陽性率

PN：最小陽性率

例如：各組濃度0.1,0.01， 0.001,0.0001,0.00001,0.000001，稀釋10倍，與最大濃度為0.1的抑制率分別為0.95，0.80，0.65,0.43,0.21,0.06到

計算公式：
PM =在
Pn的0.95
= 0.06

P = 0.95 +0.80 +0.65 +0.43 +0.21 +0.06 = 3.1

XM = lg0.1 = -1

LGI = lg0.1/0.01 = 1

lgIC50 = -1-1 *（3.1-（3-0.95- 0.06）/ 4）= -3.6025

IC50 = 0.00025

（2）Bliss法：自己的檢查書

（3）IC50計算軟體，請參閱下文附件

（4），使用EXCEL趨勢線尋求IC50約LD50的方法與此類似！

（5）網上尋求IC50或EC50： HREF =「htt??p://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat/JavaStat-j.htm」目標=「_blank」> http://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat / JavaStat-j.htm

結果統計

數值應用SPSS軟體進行方差分析，P <0.05顯著差異（P <0.01）的差異是非常顯著的時間為橫軸，吸光度值上的垂直軸繪制以x±s行細胞生物學，具體評價式IC50的細胞死亡的抑制率％= OD控制基團-OD實驗組/ OD控制組

可以做excel表格兩兩比較，T-測試，你可以參考你的數據應該是指多個樣本T檢驗，方差分析軟體SPSS或SAS。
/>口復用：

板使用一個很好的（最好是進口板），壞板或重用板僅做預實驗。一般貼壁細胞生長的重用培養板效果不是很好，因為培養板表面塗了一層的貼壁細胞的物質，在生產，可能會失去清潔後懸掛或半懸浮培養細胞的生長也建議不要使用太多次，甚至進口的板子，次數不超過3次，最終測量值的1/3，什麼最好的價值。

板塊強烈建議不要重復使用：泡沫酸，但泡完酸板是非常有利於細胞的生長，會有不良帖子壁，細胞生長緩慢，等.2，非常徹底的消毒有關的董事會，如果存在的話，那麼運行的風險.3重復使用洗板。不幹凈，在訓練過程中容易出現雜質

再利用的做法：

洗滌2％的NaOH浸泡4小時，然後浸泡4小時1％鹽酸，水為15倍，用蒸餾水洗滌三次，乾燥，UV照射過夜（UV多於兩個小時消毒罐）

實踐：

氣泡酸2-4小時，老師讓我們做了四個多小時（普通玻璃儀器過夜）。撈出，沖洗，乾燥，紫外線照射過夜。估計收集在一起與其他鈷60輻照滅菌。
/>做法：

做MTT用水和清潔劑的水沖洗板，然後用洗衣粉水（注意最好讓清潔劑的第一打開）幾個小時。，沖洗

❷ 怎麼判斷幣指數操作平台是不是正規的

一些虛擬的貨幣，目前來說基本上都是不正規的，所以我們不要去投資，因為要保住自己的本金，自己不懂的情況下不要去投資。

❸ （20分）電視劇仙劍奇俠傳三的所有歌曲。最好MP3格式，要有歌詞。有曲的也要。 郵箱[email protected] 謝謝

這是歌曲。

歌詞：鄭中基-答應不愛你

曲:金大洲詞:孫藝

明明愛很清晰卻又接受分離

我只剩失戀的權利

難過還來不及愛早已融入呼吸

不存在的存在心底

雖然很努力練習著忘記

我的心卻還沒答應可以放棄了你

真的對不起答應了你不再愛你

我卻還沒答應我自己

明明愛很清晰卻要接受分離

我只剩失戀的權利

難過還來不及就讓愛融入空氣

不存在的存在心底

說好要忘記偏偏又想起

原來我的心還沒有答應放棄了你

真的對不起雖然曾經答應了你

我卻還沒答應我自己

卻又如何真的不愛你

仙劍奇俠傳3片頭麴生生世世愛吳雨霏（片頭曲）

愛還沒來天地間風雲忽然變

有情有義的人都要回來

愛總會來生死註定的來世再愛

都等了太久哭盡無奈

Rap:她從樹種來追隨前世真愛

親身體驗過春去秋又來

情到至深時烏發也濃白

劍成人後心動話燦爛地開

愛恨糾纏的生生世世

心底執著的信念為你存在

多遙遠的路都阻擋不住

再次擁有沒距離的溫度

失去自由的生生世世

有愛不懂相擁錯過了最愛

送一劍祝福再默默相助

恐怕沒以後不自覺留退路

Rap:一段記憶有三世那麼長

到最後要用一碗水去遺忘

千年寂寞侯你重見陽光

還是轉頭又縱身跳火海化成鳳凰

為情所困的生生世世

傷也被命中成雙的傷害

等不到日出一個人孤獨

讓星光代替我伴你遠途

黑白輪回的生生世世

徹底放開成全永遠的依賴

是亂世英雄或凡間俗夢

愛不離愛是把這感動留住

仙劍奇俠傳3片尾曲忘記時間胡歌（片尾曲）

沉默著走了有多遙遠

抬起頭驀然間才發現

一直倒退倒退到原點

倔強堅持對抗時間

說好了的永遠斷了線

期許了不變的卻都已改變

緊閉雙眼才能看的見

那些曾經溫暖鮮艷過的畫面

漸漸地忘記趕不上明天

只要用力地抓緊了想念

明天再也沒有你的笑臉

漸漸地忘記忘記了時間

我只要沿著記憶的路線

到最深處縱然那隻是瞬間

當眼淚滑落的是句點

心裏面始終你從沒有走遠

耳邊誓言還在迴旋

我會好好珍惜沒有你的明天

漸漸地忘記趕不上明天

只要用力地抓緊了想念

明天再也沒有你的笑臉

漸漸地忘記忘記了時間

我只要沿著記憶的路線

到最深處縱然那隻是瞬間

仙劍奇俠傳3插曲光棍胡歌（插曲）

每天都伸著懶腰大搖大擺的享受

這春暖花開多瀟灑

為感情繁瑣那太傻

乘著風滿世界嘻嘻哈哈的亂逛

有太多新奇等我逍遙啊

天知道寂寞什麼滋味

乘著風滿世界嘻嘻哈哈的亂逛

有太多新奇等著我逍遙啊

天知道寂寞什麼滋味我先開心

其他的事想它幹嘛

我以為我就是自由自在的一個人

為什麼我一天沒見到你就焦躁難忍

我怎麼變得這么蠢

我以為我就是這樣快樂的光棍

卻為何老是拚命跟自己斗氣較真

才發現我已經愛上你……

仙劍奇俠傳3插曲偏愛張芸京(插曲)

把昨天都作廢現在你在我眼前我想愛請給我機會如果我錯了也承擔認定你就是答案我不怕誰嘲笑我極端相信自己的直覺頑固的仍不喊累愛上你我不撤退我說過我不閃躲我非要這麽做講不聽也偏要愛更努力愛讓你明白沒有別條路能走你決定要不要陪我講不聽偏愛看我感覺愛等你的依賴對你偏愛痛也很愉快把昨天都作廢現在你在我眼前我想愛請給我機會如果我錯了也承擔認定你就是答案我不怕誰嘲笑我極端相信自己的直覺頑固的仍不喊累愛上你我不撤退我說過我不閃躲我非要這麽做講不聽也偏要愛更努力愛讓你明白沒有別條路能走你決定要不要陪我講不聽偏愛看我感覺愛等你的依賴對你偏愛不後悔有把握我不閃躲我非要這麽做講不聽也偏要愛更努力愛讓你明白沒有別條路能走你決定要不要陪我講不聽偏愛看我感覺愛等你的依賴對你偏愛痛也很愉快痛也很愉快

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一首插曲《你是我一首唱不完的歌》則悠揚地哼唱出澹澹的想念和哀愁

仙劍奇俠傳3插曲你是我一首唱不完的歌郭蘅祈（插曲）

NA~~NA~~~

兄弟聯的熱血插曲《我做我的王》更是讓原聲帶的聆聽性更多樣而豐富。

仙劍奇俠傳3插曲我做我的王兄弟聯（插曲）

現在起緊綳每個神經每一秒都是激情

(全世界都已屏住呼吸)

這戰役需要你我齊心朝著終點前進

(沒有人是逃兵)

挺起你那熾熱胸膛鋼鐵般的脊樑

哪怕是狂風暴雨也要佇立

用肩膀築一道城牆在視線前方

用耀眼的光芒

我做我的王死也不會投降

我們史上最頑強

什麼叫瘋狂瘋狂就是力量

未來說闖就闖

我做我的王主宰整個現場

贏要贏得夠漂亮

勝利握在我們手上立正站好都別搶

123拍掉身上灰塵站起來繼續馳騁

(你的心早已開始沸騰)

這戰場上沒有真的敵人也不問可不可能

(全靠另一個人)

挺起你那熾熱胸膛鋼鐵般的脊樑

哪怕是狂風暴雨也要佇立

用肩膀築一道城牆在視線前方

用榮耀的光芒

我做我的王死也不會投降

我們史上最頑強

什麼叫瘋狂瘋狂就是力量

未來說闖就闖

我做我的王主宰整個現場

贏要贏得夠漂亮

勝利握在我們手上立正站好都別搶

看烏雲慢慢的散開陽光灑下來

未來更多未知精彩

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Betheonebetheonefight

我做我的王死也不會投降

我們史上最頑強

什麼叫瘋狂瘋狂就是力量

未來說闖就闖

我做我的王主宰整個現場

贏要贏得夠漂亮

勝利握在我們手上立正站好都別搶

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青鳥飛魚-此生不換

作詞：楊漩予作曲：聞震

歌詞整理：小草、20985315

時光穿不斷流轉在從前

刻骨的變遷不是遙遠

再有一萬年深情也不變

愛像烈火般蔓延

記憶是條長線盤旋在天邊

沉浮中以為情深緣淺

你再度出現我看見誓言

承諾在水天之間

回頭看不曾走遠

依依目光此生不換

要分散不習慣

怎麼算都太難

分開之後更勇敢

願這愛世代相傳

喝不完忘情水不讓你如煙

前塵再懷戀望劍如面

揮舞的瞬間別再閉上眼

錯過驚世的依戀

回頭看不曾走遠

眷戀一人流連忘返

多少汗夠溫暖你哭喊我呼喚

聽清耳邊的呢喃

別害怕風輕雲淡

回頭看不曾走遠

依依目光此生不換

要分散不習慣

怎麼算都太難

分開之後更勇敢

願這愛世代相傳

❹ MTT中文名字是什麼

MTT,中文名稱為噻唑蘭,分子式為C18H16N5SBr,分子量為414.3,CAS為298-93-1。
希望能夠對你有所幫助。

❺ MTT BrdU 結果比較

實驗是會有誤差的，這點最主要。
MTT測酶活性，而BrdU測DNA合成。沒有可比性。

❻ 求翻譯，應該是拼音字母開頭wmwapjgajmttjdptjwm ，能看出講的是啥嗎

看不出，這種拼音字母有多種組合。

拼音字母指拼音文字所用的字母，也指漢語拼音方案採用的為漢字注音的二十六個拉丁字母。

世界上第一套拼音字母是由腓尼基人創制的。由於腓尼基發達的航海和國際商業貿易，一方面經濟需要及時編制商業文件，要求有一套普遍易懂的、簡單方便的文字體系;另一方面，由於腓尼基從事國際商業活動，廣泛接觸並熟悉古代各國的文字，使它創造新的字母文字成為可能。

於是，腓尼基人利用埃及的象形文字和巴比倫的模形文字創造了世界上第一套拼音字母。 古代希臘字母和阿拉米亞字母都來源於腓尼基字母。希臘字母後來又發展為拉丁、斯拉夫字母;阿拉米亞字母後來發展為印度、阿拉伯、亞美尼亞、維吾爾等字母。可以說，腓尼基字母是現今世界各族字母的共同祖先。

拼音字母構成

1、23個聲母

b、p、m、f、d、t、n、l、g、k、h、j、q、x、zh、ch、sh、r、z、c、s、y、w。

2、24個韻母

其中：

單韻母6個：a、o、e、i、u、ü。

復韻母9個：ai、ei、ui、ao、ou、iu、ie、üe、er。

前鼻韻母5個：an、en、in、un、ün。

後鼻韻母4個：ang、eng、ing、ong。

16個整體認讀：

、chi、shi、ri、zi、ci、si、yi、wu、yu、ye、yue、yuan、yin、yun、ying。

❼ 三洋電飯煲ECJ-18MTT內膽可以如何替代

不是不可以替代的b用他專用的裝配的那種內檔是比較好的