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『壹』 有人了解過PTC ASIA聚集過哪些行業資源嗎
具體是多少就沒注意，不過我知道PTC ASIA，也就是亞洲國際動力傳動與控制技術展覽會將繼續匯聚行業創新科技與產品，比如說展會主辦方會邀請更多來自機床、工程機械、汽車製造、能源電力、石油化工等眾多行業的專業觀眾蒞臨現場。所以這一塊的行業資源會比較集中，可以到展會現場去參觀看看。
『貳』 ptc聚合物材料必須是半結晶的嗎
ptc聚合物材料必須是半結晶的
高分子PTC熱敏電阻是一種具有正溫度系數特性的導電高分子材料，它與保險絲之間最顯著的差異就是前者可以多次重復使用。這兩種產品都能提供過電流保護作用，但同一隻高分子PTC熱敏電阻能多次提供這種保護，而保險絲在提供過電流保護之後，就必須用另外一隻進行替換。高分子PTC熱敏電阻與雙金屬電路斷路器的主要區別在於前者在事故未被排除以前一直出於關斷狀態而不會復位，但雙金屬電路斷路器在事故仍然存在時自身就能復位，這就可能導致在復位時產生電磁波及火花。同時，在電路處於故障條件下重新接通電路可能損壞設備，因而不安全。高分子PTC熱敏電阻能夠一直保持高電阻狀態直到排除故障。
『叄』 聚合酶鏈反應的應用模式
用第一套引物擴增15～30個循環，再用擴增DNA片段內設定的第二套引物擴增15～30個循環，這樣可使待擴增序列得到高效擴增，而次級結構卻很少擴增。用起始引物限量方法或Centricon30(Amicon)分子濾過器離心，在第二套引物加入前去除第一引物。此方法已成功地用來分析中國倉鼠卵巢細胞AS52的分子突變。AS52細胞含有單拷貝的細胞gpt（guanine phos－phribosytransferase）基因，與哺乳動物具有同源性。套式引物PCR減少了引物非特異性退火，從而增加了特異性擴增，提高了擴增效率。對環境樣品中微生物檢測和單拷貝的基因靶DNA的擴增是非常有效的。
若將套式PCR的內外引物稍加改變，延長外引物長度（至25～30bp），同進縮短內引物長度（15～17bp），使外引物先在高溫退火溫度下做雙溫循環擴增，然後改換至三溫循環，使內引物在外引物擴增的基礎上作低溫火溫度的三溫循環直到擴增完成，這樣就可以使兩套引物一次同時加入，兩種循環一氣呵成，等於只做一次PCR，而靈敏度與套式二次PCR無異，在我們最近推出的PTc 51氣流式DNA熱循環儀上就可以完成全部程序。套式一次PCR的成功，使PCR檢測的全過程可以在5h內完成，使當天出檢驗報告成為現實，也使PCR檢測走入臨床有了現實的基礎。 用多對引物同時擴增幾條DNA片段的方法稱為復合PCR。這一方法最初是由Chanberlain 等檢測人的基因發展而來。Bej等隨之發展了對環境樣品中不同屬細菌相關基因序列同時PCR擴增的檢測方法。兩種不同的軍團菌（legionella）基因，一為特異嗜肺L基因（mip），另一種為L-5SrRNA基因，通過引物搖擺（staggered）添加進行復合PCR。首先mip引物PCR擴增7個循環，然後加入5SrRNA引物PCR擴增38個循環。加入不同量的LacZ和LacB基因引物進行PCR擴增可以檢測大腸桿菌和與人類糞便污染有關的細菌包括E.coli大腸菌、腸源致病沙門氏菌和志賀氏菌。
在復合PCR中，所有引物Ta值應相近。如果兩對引物Tq值差異超過±℃10%，會使擴增產物的量明顯不同，其中一種擴增產物或目的DNA很難觀察到。另外，靶DNA的長度也應相近，差別大時短片的靶DNA會優先擴增，因此，會產生不同產量的擴增產物，為此，須採用DNA搖擺擴增或加入不等量的引物方法進行解決。
反向PCR（Inverse PCR或Reverse PCR）
反向PCR的目的在於擴增一段已知序列旁側的DNA，也就是說這一反應體系不是在一對引物之間而是在引物外側合成DNA。反向PCR可用於研究與已知DNA區段相連接的未知染色體序列，因此又可稱為染色體緩移或染色體步移。這時選擇的引物雖然與核心DNA區兩末端序列互補，但兩引物3』端是相互反向的。擴增前先用限制性內切酶酶切樣品DNA，然後用DNA連接酶連接成一個環狀DNA分子，通過反向PCR擴增引物的上游片段和下游片段；現已制備了酵母人工染色體（YAC）大的線狀DNA片段的雜交探針，這對於轉座子插入序列的確定和基因庫染色體上DNA片段序列的識別十分重要。
該方法的不足是：①需要從許多酶中選擇限制酶，或者說必須選擇一種合適的酶進行酶切才能得到合理大小的DNA片段。這種選擇不能在非酶切位點切斷靶DNA。②大多數有核基因組含有大量中度和高度重復序列，而在YAC或Cosmid中的未知功能序列中有時也會有這些序列，這樣，通過反向PCR得到的探針就有可能與多個基因序列雜交。
利用反向PCR可對未知序列擴增後進行分析，探索鄰接已知DNA片段的序列，並可將僅知部分序列的全長cDNA進行分子克隆，建立全長的DNA探針。適用於基因遊走、轉位因子和已知序列DNA旁側病毒整合位點分析等研究。 LP-PCR（Labelled Primers PCR）是利用同位素、熒光素等對PCR引物5』端進行標記，據此檢測目的基因的存在與否，與常規PCR相比更為直觀，省去了限制性內切酶酶切及分子雜交等繁瑣步驟，而且一次可以同時分析多種基因成分，因而特別適合於大量臨床標本的基因診斷。該方法只對PCR產物進行定性鑒定。
彩色PCR（Colorcomplement assay）直譯為「著色互補性檢測」，是LP-PCR的一種，彩色PCR意譯更為明確：它用熒光染料標記引物的5』端。熒光染料JOE和FAM呈綠色熒光；TAMRA呈紅色熒光；COUM呈藍色熒光。不同熒游標記的引物同時參加反應，擴增後的目的基因會分別帶有引物5』端的染料，通過電泳或離心沉澱，肉眼就可以根據不同熒光的色澤判斷目標基因是否存在及擴增基因的類型。通常僅需2種不同顏色的引物，一種作為基因檢測引物；另一種作為控制條件的內對照，即可診斷基因缺失、染色體易位或感染某種病毒。檢測多種點突變時，可用更多的色彩，如多點突變的遺傳病、幾種可疑病毒感染、HLA位點分析都可以用彩色PCR同時檢測多個位點。 在聚丙烯管中可以對多種含膜板材料進行PCR，而在顯微玻片上用組織細胞塗片或切片直接進行DNA擴增的方法就稱為玻片PCR（Slide-PCR）。
先將細胞塗片或呈單層細胞，然後用甲醇/醋酸（3：1，V/V）、Carnoy溶液、無水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5～15min。用蒸餾水沖洗，乾燥，直接使用或保存於-20℃備用。在玻片上劃20mm×28mm為免疫組化反應區。加入30μl PCR反應混合液，其中含10mmol/L TrispH8，3,50mmol/L KCl，1.5mmol/L MgCl2，200μmol/l dNTPs，100nmol/L引物，0.01%（V/V）明膠，0.2%BSA，2.5u/100μl Taq酶。然後蓋上22mm×40mm的蓋玻片，邊緣用石蠟油封好。把玻片放入PCR熱循環儀金屬塊上，使金屬塊與樣品呈最大程度接觸，同在聚丙烯管中一樣，進行30～40個循環。對於較短的擴增片段在後期循環中變性溫度可降低。反應後，將致冷玻片放在氯仿中除去大部分石蠟油，但不取出蓋玻片，用一個尖鑷子輕輕拈起蓋玻片一角，在相對的一角中PCR反應混合液呈半月形液面，用移液器回收。一般可回收25μl混合液，將反應產物進行瓊脂糖電泳或用套式PCR引物按標准PCR進行重新擴增。片上擴增物可做原位雜交顯示。
在Slide-PCR中，需0.1%～1%的BSA。加入BSA可以保證擴增結果，但效率不一定很高。明膠（至少0.0001%）,對擴增1kb左右的靶DNA十分重要。但對小片段擴增結果影響不大。不同的樣品提取方法或固定法對Slide-PCR都可行。
Silde-PCR的機理可能是在起始變性過程中一部分DNA從細胞中洗提出來，然後在細胞和玻片的水相中進行PCR。用地高辛標記的人全基因組DNA探針雜交表明在起始循環中DNA極微量，而30個循環後很豐富。常規細胞染色表明只有少量的形態改變。
Silde-PCR對於玻片上的細胞樣品提供了一種較好的方法，而不必再把這些樣品從玻片上括下來，使操作簡便，污染減少。本方法對於原樣品量極微且需病史追蹤保存的（如子宮頸塗片或塗片）具有實用價值。 RNA的多聚酶鏈式反應（RT-PCR）是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcrip－tion, RT）與PCR，可用於檢測單個細胞或少數細胞中少於10個拷貝的特異DNA，為RNA病毒檢測提供了方便；並為獲得與擴增特定的RNA互補的cDNA提供了一條極為有利和有效的途徑。
RNA擴增包括兩個步驟：①在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補鏈cDNA；②加熱後cDNA與RNA鏈解離，然後與另一引物退火，並由DNA聚合酶催化引物延伸生成雙鏈靶DNA，最後擴增靶DNA。
在RT-PCR中關鍵步驟是RNA的逆轉錄，cDNA的PCR與一般PCR條件一樣。由於引物的高度選擇性，細胞總RNA無需進行分級分離，即可直接用於RNA的PCR。但RT-PCR對RNA製品的要求極為嚴格，作為模板的RNA分子必須是完整的，並且不含DNA、蛋白質和其它雜質。RNA中即使含有極微量的DNA，經擴增後也會出現非特異性擴增；蛋白質未除凈，與RNA結合後會影響逆轉錄和PCR；殘存的RNase極易將膜板RNA降解掉。硫氰酸胍（GaSCN）-CsCl法或酸性硫氰酸胍-酚-氯仿法可提得理想的RNA製品，尤以後者方法為佳，適合一般實驗室進行。
常用的逆轉錄酶有兩種，即禽類成髓細胞性白血病病毒（Avianmyeloblastosis virus, AMV）和莫洛尼鼠類白血病病毒（Moloney murineleukemia virus, MO-MLV）的逆轉錄酶（RT）。一般情況下用Mo-MLV-RT較多，但模板RNA的二級結構嚴重影響逆轉錄時，可改用AMV-RT，因後者最適溫度為72℃，高於Mo-MLV-RT的最適溫度（37℃），而較高的反應溫度有助於消除RNA的二級結構。
一步法擴增（one step amplification）是為了檢測低豐度mRNA的表達，利用同一種緩沖液，在同一體系中加入逆轉錄酶、引物、Taq酶、4種dNTP直接進行mRNA反轉錄與PCR擴增。發現Taq酶不僅具有DNA多聚酶的作用，而且具有反轉錄酶活性，可利用其雙重作用在同一體系中直接以mRNA為模板進行反轉錄和其後的PCR擴增，從而使mRNA的PCR步驟更為簡化，所需樣品量減少到最低限度，臨床小樣品的檢測非常有利。用一步法擴增可檢測出總RNA中小於1ng的低豐度mRNA。該法還可用於低豐度mRNA的cDNA文庫的構建及特異cD－NA的克隆，並有可能與Taq酶的測序技術相組合，使得自動反轉錄、基因擴增與基因轉錄產物的測序在一個試管中進行。 1．DNA-PCR定量用同位素標記的探針與電泳分離後的PCR擴增產物進行雜交，根據放射自顯影後底片曝光強弱可以對模板DNA進行定量。Abbot等利用這種方法對人類T細胞白血病反轉錄基因進行了定量研究。
PCR擴增產物用專為檢測ds-DNA而設計的微量熒光計定量，利用染料H33258專與雙鏈DNA結合而使熒光增強50倍的特性。可以從標准模板系列稀釋擴增產物量曲線上讀出樣品中模板DNA的量或拷貝數，達到PCR定量的目的。
利用倍比稀釋模板作系列稀釋PCR，求出最低（PCR-EB）檢測限來比較，也是常用的半定量PCR方法。
2．mRNA-PCR定量由於MRNA-PCR定量需經兩個酶（RT和Taq）催化，因而影響因素較多。1989年Wang等報道了低豐度mRNA絕對定量方法。利用濃度已知且與待測靶mR-NA序列相同的內對照mRNA（其片段長短不同，便於PCR擴增後產物的分離），在同一體系中，用相同的由32P標記的引物與待測mRNA一同進行逆轉錄和PCR擴增，擴增產物電泳後，分別測定二者產物放射性強度，由預先制備的標准曲線推算出每個樣本特異mRNA的量。Gilliland等的結果表明，在1ng總RNA中可以對小於1pg的特異mRNA進行定量。這一定量方法在腫瘤、代謝失調、基因表達調控等研究中均有重要意義。
例如：假定我們要研究的DNA雙鏈兩端的序列是：TATTCGGGCTTTCCAAGCAACTAG......................CTAGATAGGTTGCCGATCCGTAAA在PCR之前，我們首先人工合成兩段有20－30鹼基的引物，能夠分別與上下兩條鏈的一端配對，比如一條是（為與模板能夠區別，以小寫表示）:ataagcccgaaaggttcgtt，另一條就是tttacggatcggcaacctat。把這兩段引物和DNA模板、DNA聚合酶、底物（四種脫氧核苷）混合在一起，我們就可以開始做PCR了。
第一步叫「變性」，把樣品加熱到94－96℃一到數分鍾，讓DNA模板變性變成單鏈。
第二步叫「退火」，讓樣品的溫度下降到50－65℃一到數分鍾，引物就可以結合到模板上去。
TATTCGGGCTTTCCAAGCAACTAG...........CCGAAAGGTTCGTTGATC...........CTAGATAGGTTGCCGATCCGTAAA第三步叫「延伸」，讓樣品的溫度上升到72℃一到數分鍾，DNA聚合酶就可以從引物開始用底物復制出新鏈。
TATTCGGGCTTTCCAAGCAACTAG............................................CTAGATAGGTTGCCGATCCGTAAA這樣經過三步一個循環，一條雙鏈就變成了兩條，再來一個循環，就變成了四條……在一個由計算機控制的循環加熱器上經過三十個循環，就可以把原來的樣品精確地擴增了2的30次方倍，而這只需要兩三個小時。PCR要成功，必須要有能夠忍耐高溫、在高溫下仍然能有活性的DNA聚合酶。這種酶可從生活在溫泉中的細菌中提取，其中最常用的一種叫Taq聚合酶。野生型的Taq聚合酶保真度較差，在復制比較長的模板時容易發生點突變。通過遺傳工程，我們已獲得了高保真度的Taq聚合酶，大大提高了PCR復制的精確程度。
這個要看吧，看挖的幣種，有的高，有的低