pcr挖礦計算

❶ pcr中如何計算原始DNA

引物與DNA單鏈結合後即形成局部雙鏈,即可在酶的作用下啟動脫氧核苷酸鏈的合成,不斷在引物的3端結合脫氧核苷酸.直至復制完成.

❷ 求PCR產物計算公式的推導，過程詳細一點！！！

給您一個連接地址，文章是 PCR產物計算公式的推導與修正 http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-YNSK200901014.htm
希望能對您有幫助。謝謝！

❸ 做熒光定量PCR時，它的計算公式是什麼

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n為擴增反應的循環次數，X0為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產物的量。

起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

(3)pcr挖礦計算擴展閱讀

傳統定量PCR方法簡介：

1）內參照法：在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒游標記，下游引物不標記。

在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由於內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。

2）競爭法：選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒游標記）。

擴增後用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。

❹ 求助：PCR擴增效率的如何計算

在網上搜到了兩個計算realtime PCR擴增效率的公式，但相互不同，不知哪個才是正確的。請大家明辨！
第一種計算：

兩個都是通過標准曲線法計算擴增效率，其實是一樣的，按照定義理解，完全擴增的話1條變2條，2條變4條，擴增效率200％，但一般通過軟體計算都是提供第一種方法（用的比較多），擴增效率最大為100％。本質上兩者是相同的。

❺ PCR中Tm值如何計算

引物設計軟體都可以給出Tm，引物長度，鹼基組成，引物使用緩沖的離子強度有關。
長度為25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)
對於更長的寡聚核苷酸，Tm計算公式為：
Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size
公式中，Size = 引物長度。

❻ pcr擴增時如何計算各組分的體積（即各種物質根據反應總體積，如何確定其他物質的體積）

固定的反應試劑：比如buffer，dNTP,酶的用量一般都是固定的，按照protocol給出的要求加。
關鍵是模板和引物的量。模板不能加太多，一般是50ul體系10-100ng左右，體積根據你DNA模板的濃度確定，比如你的DNA濃度是100ng/ul，你加1微升就夠了。如果濃度太高，適當稀釋一下。
引物的濃度一般是終濃度0.2uM。把引物稀釋成10uM的，加1微升到50ul體系裡頭。最後用水補齊到50ul。加的時候最好先加水，再加buffer，然後模板，引物，最後加酶。冰上操作。

❼ 有關pcr目的基因的計算問題

那是指從一個大片斷模板中擴一個相對小一點的片斷。第一輪擴增以後，得到的並不是目的產物，（可以參考下圖），可以這樣理解，如果變性在復性後，得到原來的模板，加一對（兩條鏈）兩端凸出中央互補的產物，因為有模板的存在，這個產物每一輪都會增加一個，以線形擴增N輪後有N個。

我們知道總的擴增產物（雙鏈）是指數增長的，N輪後為2^N個（N為循環數）；

第三輪才開始目的產物的指數擴增。在最後的產物中可以認為有模板、兩端凸出中央互補的產物（實際上很可能模板的鏈和非特異產物的鏈互補在一起）以及特異的產物

因此目的產物=總產物-非目的產物-模板=2^N-N-1

經四輪後為16-4-1=11

其實你只要記住上面公式就行了

❽ PCR模板怎麼算

Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)。

n為擴增反應的循環次數，X0為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產物的量。

起始拷貝數越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數的標准品可作出標准曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數的對數，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標准曲線上計算出該樣品的起始拷貝數。

注意事項

首先是確定的總體積，可以選擇10ul, 20ul, 50ul等。

其次是根據mix，算出總體積中mix使用的體積。

根據自己提取或者逆轉錄得到的DNA濃度，以及一次pcr反應所使用模板的量，計算出DNA的體積。

根據引物濃度以及引物使用的終濃度，計算出引物使用的量。

最後用總體積減去上面幾部分的體積，得到的就是水的體積。

❾ pcr 灰區怎麼計算

引物設計軟體都可以給出Tm，引物長度，鹼基組成，引物使用緩沖的離子強度有關。
_ざ任?25mer以下的引物，Tm計算公式為：Tm=4℃(G+C)+2℃(A+T)
_雜詬さ墓丫酆塑賬幔_m計算公式為：Tm=81.5+16.6xLog10[Na+]+0.41(%GC)_600/size公式中，Size=引物長度
_CR的原理是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按鹼基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
_CR最有價值的應用領域就是對感染疾病的診斷。理論上，只要樣本有一個病原體存在，PCR就可以檢測到。
_謔笛櫓蟹⑾鄭_NA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低後又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
_牽_NA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。

❿ pcr擴增計算

1個雙鏈DNA經過10次擴增後，變為2的10次方=1024個，其中帶有部分母鏈的較長的DNA片段有2乘以10=20個，目的基因數=1024-20=1004個，選D