trx標簽蛋白

『壹』 trx標簽蛋白大小

11.6kDa。
trx標簽的硫氧還蛋白A又叫TrxA，分量為11.6kDa，來源於大腸桿菌。
TrxA標簽最獨特的優點是它的熱穩定性。

『貳』 6×his標簽結合蛋白分離純化時用不用切掉

分離純化時是否需要切除his標簽要看標簽是否會影響到蛋白的活性。一般情況下6xhis是一個非常小的標簽，不會對蛋白整體的結構和活性有太大影響，如果是加了Trx的His標簽可能會需要切除掉。

『叄』 pET-32a攜帶標簽大小究竟是多少

很簡單，pet32a表達的是6*his標簽的蛋白，你表達的基因如果有x個氨基酸，則蛋白大小約為(x+6)*110/1000kd。

『肆』 trx是什麼意思

trx懸掛訓練;硫氧化還原蛋白;硫氧還蛋白;蛋白;收發信機。

Trx has various biological functions in keeping stable redox status of cells.

硫氧還蛋白具有多種生物學功能，對維持體內穩定的氧化還原狀態具有重要的作用。

Construction of recombinant adenovirus vector with TRX gene by Tet-Off inction.

Tet-Off誘導的硫氧還蛋白基因重組腺病毒載體的構建。

These studies have shown that: TRX can suppress tumor cell apoptosis.

研究表明：TRX可以抑制腫瘤細胞凋亡。

Trx plays crucial roles in regulating cell growth, apoptosis and gene transcription.

Trx具有調節細胞生長、抑制凋亡、調節基因轉錄等功能。

CONCLUSION: TRX protein plays an important role in the defense response of myocardium against oxidative stress.

結論：TRX蛋白在心肌的氧化應激防禦反應中起重要作用。

『伍』 帶有trx標簽會不會影響蛋白的抗原性

有可能的
trx標簽是比較大的融合標簽，有20多KDa
非常有可能改變蛋白的抗原決定簇
一般為了不影響蛋白的功能，會在trx標簽和目標蛋白之間加一個酶切位點，比如腸激酶的位點DDDDK，把trx標簽去除掉

『陸』 TRX標簽蛋白怎麼純化

一般這個載體中都會有His 標簽，直接用鎳柱純化即可

『柒』 蛋白的表達與純化

蛋白表達純化已經是非常經典簡單的實驗了，沒有LSS說的那麼嚇人。
說說我的蛋白表達純化以及下面的單抗製作工作總體設計概要吧：

1 首先要知道你要純化蛋白的編碼DNA序列，查閱相關文獻，看目的基因在那些細胞或者組織中高表達，進而設計該基因的引物，擴增出目的DNA片段的ARF。這一布叫目的基因片段的獲取

2 構建表達載體：根據你獲得的基因本身的特性確定原核或者真核載體中表達，這一步的主要問題就是構建帶有目的基因的質粒，導入表達系統中。一般原核表達時間短，成本低，表達量大，常優先考慮；但是有些基因在E coli中就是表達不出，可能是密碼子優化等出現問題，也或者是由於想純化得到更好的活性蛋白的考慮（原核的蛋白折疊系統顯然沒有真核的好），有很多研究者選擇在畢赤酵母中表達。（我手裡就有相關資料，因為以前做過表達純化及後來的單抗制備），這一步再強調一下，優化密碼子對於蛋白的成功表達很重要

3 載體構建好了，下面就是重組蛋白的表達了。這一過程涉及到用多少的誘導劑，誘導多少時間才能得到最多的蛋白的問題，即優化表達條件。就是在上述不同量誘導劑誘導條件下，取菌體上清（分泌型）或者破碎細胞（胞內表達的蛋白）電泳，看是否得到目的分子量大小的蛋白

4 蛋白表達成功，下面是根據蛋白質本身親水/疏水，電荷帶電特性等確定蛋白純化的方法。一般步驟：離心，取蛋白所在的相
如果是分泌表達的蛋白，則取上清，超濾，沒有超濾儀器可以用透析袋等代替，用離子交換柱層析。基本上這一步能得到純化的95％的蛋白，電泳鑒定基本不會看到有雜帶出現。如果還是純度不符合要求，可以在表達蛋白最初在構建表達載體質粒的時候在蛋白的ORF後面加上HIS－標簽，這樣得到的蛋白不但可以用於HIS柱的進一步純化，在不確定自己的融合蛋白是否有表達的時候，也可以單單用抗HIS的抗體做一WB，分析確認目的蛋白是否表達，這是蛋白表達的常用手段。

5 經過純化後的蛋白仍然含有一部分無機鹽，如果需要的話可以將蛋白經真空凍干機凍干，得到純蛋白。

我們實驗室做出來的一個蛋白，編碼序列GC含量高75達％，但是功夫不負有心人，只要你想做那件事情，積極的尋找解決問題的手段，總會搞定的，沒有跨不過的坎。如果坎太寬，搭橋解決總行。

『捌』 重組蛋白的組氨酸標簽 怎麼去掉

6xHis標簽可用一些酶，譬如TAGZyme去除

『玖』 pet-32a空載體是可溶性表達嗎

該空載體緊緊會表達一段Trx標簽蛋白，加上his標簽，約20kd左右，是高度可溶的。

『拾』 pet32a切除標簽

這個我剛好做過，用腸激酶切除~~用Ni-NTA鎳柱純化，你給我個郵箱，方法我發給你