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2018trx走勢圖

發布時間: 2022-09-12 18:07:56

❶ 求一個簡單的js實現輪播代碼

<!DOCTYPEHTML>
<html>
<head>
<title>JS無縫滾動圖片</title>
<metacharset=UTF-8/>
<styletype="text/css">
*{
margin:0;
padding:0;
}
#div2{
margin:auto;
width:602px;
overflow:hidden;
left:200px;
}
#div1{
position:relative;
left:0px;
width:1200px;
}
#div1li{
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width:200px;
height:180px;
}
img{
width:200px;
height:180px;
}
ul#ul1{
position:relative;
}
</style>
<scripttype="text/javascript">
window.onload=function()
{
varoUl=document.getElementById('ul1');
vart,o;
varspeed=0;
varfunny=function()
{
t&&clearInterval(t);
t=setInterval(function()
{
speed-=200/11;
if(speed<-200){
speed=0;
oUl.appendChild(oUl.children[0]);
t&&clearInterval(t);
t=null;
o&&clearTimeout(o);
o=setTimeout(funny,1000);
}
oUl.style.left=speed+"px";
},60);
}
funny();
}
</script>
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<divid="div1">
<ulid="ul1">
<li><imgsrc="../../images/choose.png">
</li>
<li><imgsrc="../../images/deck.png">
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</li>
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</li>
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</div>
</div>
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❷ trx生態平台可信么

trx生態平台可信么?波場(TRX)本來只是一個復制粘貼的空氣幣,但是孫宇晨會營銷會蹭熱點會拉盤,直到把空氣幣拉成了市值千億的幣種,然後套現百億以上,有錢好辦事,有錢後大量的招人與買公司,包括收購BitTorrent公司,硬是把空氣幣做成了有生態支撐的豪華大項目,這種就是靠耍小聰明搞出來的項目,本質目的還是割韭菜,小勝靠智,大勝靠德,按孫宇晨的人品項目只能打3分,這種人不值得信任與投資。

2020-04-07 18:29:06

獨家記憶5星評價



TRX是什麼幣?TRX幣又稱波場,TRX幣英文全稱為TRON,在OKEx等106家交易平台上線。波場TRON以推動互聯網去中心化為己任,致力於為去中心化互聯網搭建基礎設施。旗下的波場TRON協議是全球最大的基於區塊鏈的去中心化應用操作系統協議之一,為協議上的去中心化應用運行提供高吞吐,高擴展,高可靠性的底層公鏈支持。

波場TRON還通過創新的可插拔智能合約平台為以太坊智能合約提供更好的兼容性。並且通過創新的可插拔式智能合約平台更好的兼容以太坊的智能合約。不僅可以滿足線上去中心化娛樂等應用的高並發、低延遲和海量數據傳輸的苛刻要求,而且也給普通互聯網用戶最佳的去中心化用戶體驗。 開發者可以使用波場TRON協議與虛擬機開發屬於自己和社區的應用,使用智能合約進行分布式眾籌,數字資產發行。波場TRON協議已經運行著包括陪我APP,Obike,Uplive, game.com, Kitty live,Mico等去中心化應用,活躍用戶突破一億,分布於全球超過100個國家地區。

自2018年7月24日起,波場TRON收購了位於舊金山的互聯網技術公司BitTorrent Inc、。

❸ TRX-波場是什麼

Zb的資料顯示TRX波場以推動互聯網去中心化為己任,致力於為去中心化互聯網搭建基礎設施。

❹ 如何從innodb status中的連接線程id確認到其對應的操作系統線程

如果遇到死鎖了,怎麼解決呢?找到原始的鎖ID,然後KILL掉一直持有的那個線程就可以了, 但是眾多線程,可怎麼找到引起死鎖的線程ID呢? MySQL 發展到現在,已經非常強大了,這個問題很好解決。 直接從數據字典連查找。
我們來演示下。
線程A,我們用來鎖定某些記錄,假設這個線程一直沒提交,或者忘掉提交了。 那麼就一直存在,但是數據裡面顯示的只是SLEEP狀態。
mysql> set @@autocommit=0;
Query OK, 0 rows affected (0.00 sec)

mysql> use test;
Reading table information for completion of table and column names
You can turn off this feature to get a quicker startup with -A

Database changed
mysql> show tables;
+----------------+
| Tables_in_test |
+----------------+
| demo_test |
| t3 |
+----------------+
2 rows in set (0.00 sec)

mysql> select * from t3;
+----+--------+--------+------------+----+----+----+
| id | fname | lname | birthday | c1 | c2 | c3 |
+----+--------+--------+------------+----+----+----+
| 19 | lily19 | lucy19 | 2013-04-18 | 19 | 0 | 0 |
| 20 | lily20 | lucy20 | 2013-03-13 | 20 | 0 | 0 |
+----+--------+--------+------------+----+----+----+
2 rows in set (0.00 sec)

mysql> update t3 set birthday = '2022-02-23' where id = 19;
Query OK, 1 row affected (0.00 sec)
Rows matched: 1 Changed: 1 Warnings: 0

mysql> select connection_id();
+-----------------+
| connection_id() |
+-----------------+
| 16 |
+-----------------+
1 row in set (0.00 sec)

mysql>
線程B, 我們用來進行普通的更新,但是遇到問題了,此時不知道是哪個線程把這行記錄給鎖定了?
mysql> use test;
Reading table information for completion of table and column names
You can turn off this feature to get a quicker startup with -A

Database changed
mysql> select @@autocommit;
+--------------+
| @@autocommit |
+--------------+
| 1 |
+--------------+
1 row in set (0.00 sec)

mysql> update t3 set birthday='2018-01-03' where id = 19;
ERROR 1205 (HY000): Lock wait timeout exceeded; try restarting transaction
mysql> select connection_id();
+-----------------+
| connection_id() |
+-----------------+
| 17 |
+-----------------+
1 row in set (0.00 sec)

mysql> show processlist;
+----+------+-----------+------+---------+------+-------+------------------+
| Id | User | Host | db | Command | Time | State | Info |
+----+------+-----------+------+---------+------+-------+------------------+
| 10 | root | localhost | NULL | Sleep | 1540 | | NULL |
| 11 | root | localhost | NULL | Sleep | 722 | | NULL |
| 16 | root | localhost | test | Sleep | 424 | | NULL |
| 17 | root | localhost | test | Query | 0 | init | show processlist |
| 18 | root | localhost | NULL | Sleep | 5 | | NULL |
+----+------+-----------+------+---------+------+-------+------------------+
5 rows in set (0.00 sec)

mysql> show engine innodb status\G

------------
TRANSACTIONS
------------
Trx id counter 189327
Purge done for trx's n:o < 189323 undo n:o < 0 state: running but idle
History list length 343
LIST OF TRANSACTIONS FOR EACH SESSION:
---TRANSACTION 0, not started
MySQL thread id 11, OS thread handle 0x7f70a0c98700, query id 994 localhost root init
show engine innodb status
---TRANSACTION 189326, ACTIVE 2 sec starting index read
mysql tables in use 1, locked 1
LOCK WAIT 2 lock struct(s), heap size 376, 1 row lock(s)
MySQL thread id 17, OS thread handle 0x7f70a0bd5700, query id 993 localhost root updating
update t3 set birthday='2018-01-03' where id = 19
------- TRX HAS BEEN WAITING 2 SEC FOR THIS LOCK TO BE GRANTED:
RECORD LOCKS space id 529 page no 3 n bits 72 index `PRIMARY` of table `test`.`t3` trx id 189326 lock_mode X waiting
Record lock, heap no 2 PHYSICAL RECORD: n_fields 9; compact format; info bits 0
0: len 2; hex 3139; asc 19;;
1: len 6; hex 00000002e38c; asc ;;
2: len 7; hex 7e00000d2827c9; asc ~ (' ;;
3: len 6; hex 6c696c793139; asc lily19;;
4: len 6; hex 6c7563793139; asc lucy19;;
5: len 3; hex 8fcc57; asc W;;
6: len 4; hex 80000013; asc ;;
7: len 4; hex 80000000; asc ;;
8: len 4; hex 80000000; asc ;;

------------------
---TRANSACTION 189324, ACTIVE 641 sec
2 lock struct(s), heap size 376, 3 row lock(s), undo log entries 1
MySQL thread id 16, OS thread handle 0x7f70a0b94700, query id 985 localhost root cleaning up
Trx read view will not see trx with id >= 189325, sees < 189325
上面的信息很繁多,也看不清楚到底哪裡是哪裡。
不過現在,我們只要從數據字典裡面拿出來這部分信息就OK了。
mysql> SELECT * FROM information_schema.INNODB_TRX\G
*************************** 1. row ***************************
trx_id: 189324
trx_state: RUNNING
trx_started: 2013-04-18 17:48:14
trx_requested_lock_id: NULL
trx_wait_started: NULL
trx_weight: 3
trx_mysql_thread_id: 16
trx_query: NULL
trx_operation_state: NULL
trx_tables_in_use: 0
trx_tables_locked: 0
trx_lock_structs: 2
trx_lock_memory_bytes: 376
trx_rows_locked: 3
trx_rows_modified: 1
trx_concurrency_tickets: 0
trx_isolation_level: REPEATABLE READ
trx_unique_checks: 1
trx_foreign_key_checks: 1
trx_last_foreign_key_error: NULL
trx_adaptive_hash_latched: 0
trx_adaptive_hash_timeout: 10000
trx_is_read_only: 0
trx_autocommit_non_locking: 0
1 row in set (0.01 sec)

mysql>
原來是線程16忘掉COMMIT了。

❺ 地球上馬力最大的量產皮卡 道奇Ram1500 TRX發布

[汽車之家新車首發]?在福特F-150猛禽獨守細分市場10年之後,終於有選手願意挑戰它的地位了。道奇Ram正式發布了基於最新一代Ram1500Rebel車型的Ram1500TRX車型,新車定位於越野高性能皮卡,最大功率702馬力,峰值扭矩881牛·米。

『圖為F-150猛禽性能勁化版』

除了澎湃的動力,福特F-150猛禽還配備了能夠應付更強沖擊的懸架與減振器組合,可以支持車輛本身自帶的包括「Baja」模式在內的多種駕駛模式。

編輯總結:

我相信此刻觀眾朋友們最關心的問題便是,這樣一款車是否會正式引進國內銷售。在目前這個階段我只能說,如果按照乘用車來報關那麼肯定沒戲,6.2升發動機造成的排量稅會讓這輛車的價格高到不可理喻。當然,如果還是像F-150猛禽那樣按照卡車來報關,那麼各種稅費會低廉很多,只不過城市通行政策以及15年強制報廢就是需要仔細權衡的問題了。參考底特律其他兩家車企都向祖國正式輸出過自己的看家皮卡車型,我覺得這款Ram1500TRX還是有那麼一點可能引進國內銷售的。(文/汽車之家丁伯駿)

❻ TRX的TRC20提幣通道在哪一個交易所

咨詢記錄 · 回答於2021-11-26

❼ 蛋白質融合標簽

蛋白標簽(Protein tag)技術是指利用基因克隆手段,將具有特定功能的多肽,蛋白質結構域,甚至完整蛋白質與目標蛋白融合在一起,以實現目標蛋白的表達純化,檢測和示蹤等應用的技術。蛋白標簽融合已經成為蛋白質研究中最常用的技術之一,下面我就為大家盤一盤這些常用標簽的特點及應用。

蛋白標簽根據其功能,大致可以分為檢測標簽、表達純化標簽和示蹤標簽三類。

蛋白質的檢測方法包括質譜、酶活檢測、免疫分析等,其中應用最為廣泛的是免疫分析,常用的方法有:WB(Western Blot)、ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)、IP(Immunoprecipitation)等。免疫分析需要將目標蛋白作為抗原,注射動物,然後從免疫血清中分離抗體,根據抗原-抗體間的免疫反應進行特異性檢測。這種方法最大的缺陷就是每更換一個目標蛋白就要制備一個對應的抗體,操作繁瑣,成本昂貴。融合標簽的使用,使蛋白質免疫分析走向通用化和便利化。我們將特定的標簽與目標蛋白融合後,兩者是共同表達的,通過檢測融合標簽,可以得到目標蛋白的表達情況。經過長期的研究,目前已經開發出一些比較成熟的檢測標簽,下面就挑幾個來介紹一下:

1) HA

HA標簽,屬於小標簽,共9個氨基酸,標簽序列YPYDVPDYA,源於流感病毒的紅細胞凝集素表面抗原決定簇,對目標蛋白的空間結構影響小, 可融合到N端或者C端,可購買商業化的Anti-HA抗體檢測。HA標簽常用於蛋白質印跡,免疫熒光和免疫沉澱實驗,偶爾用於ELISA和ChIP分析。

2) His

His標簽,也是小標簽,多指6個組氨酸多肽,該標簽對目標蛋白的空間結構影響極小, 可融合到N端或者C端,一般無需切除也不會對目標蛋白功能產生影響,可購買商業化的Anti-His抗體檢測。His標簽常用於蛋白質印跡實驗。

3) c-Myc

Myc標簽,包含人類原癌基因Myc的10個氨基酸區段,序列為EQKLISEEDL,可融合到目標蛋白N端或者C端。由於可獲得高特異性抗Myc單克隆抗體,因此在Western印跡,免疫熒光和免疫沉澱實驗中被廣泛使用,但是很少用於蛋白質純化。目前,市場上已有很多可供選擇的商業化c-Myc抗體。

4) Flag, 3×Flag

FLAG標簽,是目標蛋白中一種比較流行的短肽標簽,序列為DYKDDDDK,可以與蛋白質的C端或N端融合。由於其包含腸激酶的識別位點(DDDDK),可方便去除,因此比較適合融合在目標蛋白N端。Flag標簽與同類標簽相比,更具親水性,因此通常不會變性或使與其連接的蛋白質失活,常用於真核表達系統中目標蛋白的檢測。目前已經開發出性能更好的3×Flag 標簽,共22個氨基酸,分子量2.7KDa。3×Flag標簽序列不是唯一的,有文獻直接用3個Flag的串聯重復,這不利於標簽的去除,常用的序列為序列為DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK。3×Flag可免疫原性和與抗體的親和性得到極大增強,適用於真核生物低水平表達的蛋白的檢測和純化。目前,市場上已有很多可供選擇的商業化Flag及 3×Flag抗體。

5) S

S標簽,是一段來源於胰腺核糖核酸酶 A(RNase A)N 末端的短肽,氨基酸序列為KETAAAKFERQHMDS。 通常將 S-tag 構建到目標蛋白的 N 末端或 C 末端上,可以使用商業化的 S-tag 抗體進行免疫檢測。此外,S-tag與S-蛋白質(同樣來自於RNase A)之間有強烈相互作用,因此S-tag可用於蛋白質純化,但由於洗脫條件較苛刻,為了獲得有功能的蛋白質推薦用蛋白酶切割標簽,然後洗脫目標蛋白。

6) T7

T7標簽,一種源自T7噬菌體衣殼蛋白的表位標簽,序列為MASMTGGQQMG,可融合到目標蛋白質的N或C末端,可購買商業化的Anti-T7抗體檢測。T7標簽常用於蛋白質印跡實驗。

7) V5

V5標簽,是猿猴病毒5(SV5)副粘病毒P和V蛋白上存在的小表位(Pk)短肽,序列為RNA聚合酶α亞基的95-108位氨基酸殘基GKPIPNPLLGLDST,可被融合到目標蛋白的N或C末端。在文獻報道中,大多將V5融合到目標蛋白C端,常用於哺乳動物和昆蟲細胞表達系統蛋白質印跡,免疫熒光和免疫沉澱檢測。

蛋白質純化的方法有很多,離子交換、疏水層析、分子篩和親和層析,其中純化效果最好的無疑是親和層析,它利用基質與蛋白標簽間的特異性結合,以極高的得率和純度獲得目標蛋白。下面就挑幾個常用的純化標簽來介紹一下。

1) His

His標簽,大多是指六個組氨酸組成的融合標簽,即His6,可融合在目的蛋白的C末端或N末端。His標簽在蛋白質純化領域可謂是「最靚的仔」,1987年,Hochuli等首次提出利用組氨酸標簽純化蛋白質,至今His標簽在蛋白質純化領域仍有最廣泛的應用。組氨酸殘基側鏈與固定的鎳離子有強烈的吸引力,可用於固定化金屬螯合層析(IMAC)。標簽的分子量小,只有約0.84KD,一般不影響目標蛋白的功能,此外His標簽也可用於免疫檢測,而融合His標簽的蛋白免疫原性較低,可將純化的蛋白直接注射動物進行免疫並制備抗體。

2) GST

GST(谷胱甘肽巰基轉移酶)標簽,是蛋白質純化最常用的標簽之一,GST是大標簽,它是一個完整的蛋白質,分子量約26KD。GST一方面具有高度可溶性,能夠增加目標蛋白的可溶性;另一方面它可以在大腸桿菌中大量表達,提高目標蛋白的表達量。因此被廣泛應用於各種融合蛋白的表達,可以在大腸桿菌和酵母菌等宿主細胞中表達。GST標簽融合蛋白可直接從細菌裂解液中利用含有還原型谷胱甘肽瓊脂糖凝膠的親和樹脂進行純化,用10mM 還原型谷胱甘肽洗脫,可得到高濃度、高純度融合蛋白。不過由於GST標簽較大,通常需要將該標簽切除,因此GST一般融合在靶標的N端。對於目標蛋白為活性酶的情況,如果經過活性驗證確認GST對酶的活性沒有影響,也可以保留標簽。目前,也有很多商業化的GST抗體可用於對目的蛋白進行用特異性檢測。

3) MBP

MBP(麥芽糖結合蛋白)標簽,是蛋白質純化最常用的標簽之一,也是大標簽,分子量大小在40kDa以上,由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加目標蛋白在細菌中的溶解性,尤其是真核蛋白,也可以增加融合蛋白表達量。MBP可以和交聯澱粉親和樹脂結合,結合的融合蛋白可用10-20mM麥芽糖在溫和條件下洗脫,得到高純度、高濃度目標蛋白。MBP的特點與使用方法與GST十分相似,也有專門的商品化抗體進行檢測。需要注意的是,MBP序列有兩種形式,一種N端含有信號肽,適用於毒性蛋白的表達純化,一般融合在N端;一種不含信號肽序列,可融合在N端或C端,多融合在N端。

4) CBD

CBD標簽,一般是指來源於枯草桿菌的幾丁質結合結構域,分子量約5kDa,該標簽由NEB公司推出,結合其IMPACT(Intein Mediated Purification with an Affinity Chitin-binding Tag)系統,用於(毒性)目標蛋白的表達與純化。在IMPACT系統中,CBD和一個來源於酵母的intein蛋白質組成一個雙效的融合標簽。Intein是一個蛋白質剪接元件,類似於基因組中的內含子,intein在較低的溫度和還原條件下發生自身介導的N端裂解,可以釋放出與之相連的目的蛋白。也就是說融合表達產物在掛上親和層析柱後只需要在低溫(4℃)條件下用含DTT,或者巰基乙醇,或者半胱氨酸的溶液洗脫,即可將目的蛋白洗脫,而將融合標簽留在純化柱上,而還原劑的小分子可以非常簡單的去除。後來NEB推出了IMPACT-CN系統(即融合標簽可以選擇在目的蛋白的C端或者N端)和更加靈活便利的IMPACT—TWIN系統,感興趣的可以自己去了解下。
(我使用過該系統,但效果並不像宣傳的那麼理想,原因有兩個:1)因為要使用DTT作為切割劑,不適合含有內部二硫鍵蛋白質的純化 2)融合基因在體內體外均存在較大的自剪切風險,在純化毒性較大的蛋白質時,很難得到目標蛋白。)

5) Strep-tag

Strep標簽,一般指Strep-tag II,是長度8個氨基酸的短肽,序列為WSHPQFEK,可以融合在目標蛋白N端或C端。Strep標簽融合蛋白與鏈黴菌抗生物素蛋白柱上的基質特異性結合,D-生物素或其衍生物可作為洗脫劑,從而實現融合蛋白的特異性純化。由於,抗體柱十分昂貴,Strep標簽在蛋白純化中並不常用。

6) Halo-Tag

Halo標簽,是一種細菌脫鹵素酶的遺傳修飾衍生物,可與多種合成的Halo-Tag配基有效地共價結合,分子量為33KDa,可融合在重組蛋白的N端或C 端,並在原核和真核系統中表達。

7) SNAP-tag

SNAP-標簽,是一種人的O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉移酶的突變體,長度為182個氨基酸,分子量約19 kDa,可與任何目標蛋白質融合,並進一步用合適的配體(例如熒光染料)進行特異性和共價標記。將純化的或未純化的SNAP-Tag融合蛋白與表面固定了苯甲基鳥嘌呤的基質混合,蛋白即可特異與底物作用,形成共價鍵,融合蛋白間接被固定在了基質表面上,可以達到更方便快捷地研究蛋白功能或純化蛋白的目的。SNAP-Tag是新一代的蛋白標簽技術,不僅專一性極高而且穩定,最大的優點是適用於多種環境下的蛋白質檢測與純化,如活細胞內、溶液中、或固態相(如SDS-PAGE gels)等。

8) SUMO

SUMO標簽,是一種小分子泛素樣修飾蛋白(Small ubiquitin-like modifier),在一級結構上與泛素只有18%的同源性,但兩者的三級結構及其生物學功能卻十分相似。研究發現,SUMO可以作為融合標簽,不但可以提高融合蛋白的表達量,且具有抗蛋白酶水解以及促進目標蛋白正確折疊,提高重組蛋白可溶性等功能。此外,使用SUMO蛋白水解酶,能識別完整的SUMO標簽,並高效的把SUMO從融合蛋白上切割下來。該標簽主要用於改善目標蛋白的表達,並非常用的純化標簽,要用於純化可採用雙標簽。

9) NusA、TrxA、DsbA

NusA標簽是一種反轉錄終止因子,能增加融合蛋白的溶解度和表達;TrxA標簽是硫氧還蛋白,幾乎存在於所有生物中,它即可能會增加融合蛋白的溶解度,方便地純化細菌粗周質提取物,也有助於外源基因形成二硫鍵;DsbA標簽是蛋白質二硫鍵異構酶,能夠增加目標蛋白溶解度,有助於形成二硫鍵。

這三種標簽,主要用於改善目標蛋白的表達,本身不用於純化,必須與另一個親和標簽聯用方可實現蛋白質純化。而且這三種標簽均具有細胞周質定位作用,因此一般融合在目標蛋白N端。這三個都屬於大標簽,可能會影響融合蛋白的性質,一般來說純化後需要去除。

示蹤標簽主要是指利用標簽本身的熒光或者催化底物發射熒光或者可見光,來檢測目標蛋白在生物體內定位、轉移、互作的情況。示蹤標簽一般分子量較大,需要在標簽與目標蛋白之間加Linker序列,避免兩個蛋白相互影響各自的功能。示蹤標簽可與檢測標簽聯用,用於目標蛋白的檢測分析,也可與純化標簽聯用用於後繼純化。

1) GFP、EGFP、YFP

GFP(Green fluorescent protein,綠色熒光蛋白)標簽含有 238 個氨基酸,分子量約為 26.9 KDa,在維多利亞多管發光水母中發現的,在紫外線的照射下會發出綠色的熒光的蛋白,與靶蛋白融合後不會顯著地影響天然蛋白質的組裝和功能。EGFP 標簽是增強型綠色熒光蛋白,與 GFP 相比,具有更高的折疊效率(由於正確折疊的蛋白質比例更高而增加的熒光),熒光強度更強、熒光性質更穩定。YFP(Yellow Fluorescent Protein ,YFP)標簽,可以看做綠色熒光蛋白的一種突變體,其熒光向紅色光譜偏移。這些標簽與目標蛋白融合後,可以通過激光共聚焦顯微鏡,觀察融合蛋白在生物體內的情況,常用於亞細胞定位、熒光共定位分析、在體熒光成像等實驗。示蹤標簽可以加在目標蛋白的N端或C端,這個要視具體的情況而定,比如細胞定位示蹤,如果定位序列位於目標蛋白N端,標簽就要加在C端;如果定位序列位於C端,標簽就要加在N;如果定位序列位於中間,可以加在N端或C端。

2) 螢光素酶

螢光素酶(Luciferase,Luc)常作為「報告蛋白」被用於分子生物學研究中,常見的有螢火蟲熒光素酶、海腎熒光素酶和Guassia熒光素酶,他們可以催化熒光素底物發射熒光,作為示蹤標簽常用於活體成像、葯物分析等領域。攜帶熒光素酶標簽(Luc)的質粒轉染入細胞後,導入研究動物如大小鼠體內,之後注入熒光素底物,通過生物發光成像技術(BLI)來檢測光強度變化,從而實時監測疾病發展狀態或葯物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響,根據生物發光強度的變化來指示能量或生命體征。

3) Gus

Gus標簽,是細菌β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase),能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質的水解。該酶可將X-Gluc水解生成藍色物質,初始產物並不帶顏色,為無色的吲哚衍生物,後經氧化二聚作用形成5,5』-二溴-4,4』-二氯靛藍染料,此靛藍染料使具有GUS活性的部位或位點呈現藍色,可用肉眼或在顯微鏡下觀察到。因為絕大多數植物細胞內不存在內源的GUS活性,因此gus基因廣泛用作轉基因植物的報告基因。用作融合標簽時,gus標簽可放在目標蛋白的N端或C端,所產生的融合蛋白一般仍具有GUS活性,這對研究外源基因表達的具體細胞部位提供了方便條件。

當然不是,幾乎任何標簽都可以作為檢測標簽。不過上面這些標簽應用比較廣泛,檢測靈敏度較高,對應抗體、試劑等也比較成熟,是最為常用的檢測標簽,在加檢測標簽時,可以作為首選。

當然也不是,檢測標簽、純化標簽、示蹤標簽,在功能上沒有絕對的界限,所有的檢測標簽也可以用於純化,只不過需要先制備對應的抗體固定到純化基質上,比如S標簽需要S蛋白固定到純化樹脂上,這就需要購買專門的純化柱料,十分昂貴。當然也可以採取通用的做法,比如通過protein A吸附抗體,再利用抗體吸附融合的目標蛋白,但是這樣做純化效率可能不太高,吸附能力也有限,而且成本較高(protein A柱料的價格是Ni-NTA柱料的5-10倍),雖然這種方法可以得到極高的純度,但並沒有被普遍採用。

標簽選好了,那到底是該加在N端還是C端呢?在較多的報道中,標簽一般加在目標蛋白的C端,因為蛋白質折疊是從N端開始的,加在N端有被目標蛋白包埋的風險。但是,目前沒有統一的標准,要具體情況具體分析,最好參閱相關文獻。

一般檢測標簽都是小標簽,對目標蛋白的功能與結構影響不大,N端C端皆可。需要注意的是採用雙標簽的情況,如果是兩個小標簽,那就一邊一個,一般不建議串聯兩個不同的標簽,比如一個3×Flag檢測標簽,一個His純化標簽,那就應該把3×Flag放在N端,His放在C端,因為純化之後大概率需要切除3×Flag,如果兩者交換位置就無法實現這樣的目的。

His標簽是應用最廣泛的標簽,既可以用於純化也可以用於檢測,而且大多數情況不需要切除,加在N端存在提前終止翻譯和無法終止翻譯的可能,產生的副產物不利於分離純化;加C端時存在次級翻譯起始的可能,產生的副產物也不利於分離純化,雙端His有利於目標蛋白的准確檢測與純化,但可能影響酶的活性。

純化標簽分子量較大,多數情況下要被切除,因此一般放在目標蛋白N端,檢測標簽放在C端,如過必需將大的純化標簽放在C端,檢測標簽可放在目標蛋白N端或者融合蛋白C端。但檢測標簽不能放在目標蛋白與純化標簽之間。

對於GFP標簽,大多用於目標蛋白的細胞定位,應此標簽的位置就由定位序列位置決定,定位序列在C端,GFP就應該放在N端,檢測標簽應該放在GFP的N端;反之,GFP應放在C端,檢測標簽放在GFP的C端。

當融合標簽對目標蛋白的功能與結構沒有影響時,不需要切除融合標簽,這不是只針對小標簽,大標簽如GST、MBP等也是如此,NEB公司純化的一些核酸工具酶就是融合了MBP標簽的,我曾融合表達了MBP-APOBEC3A,MBP並不影響APOBEC3A的C→T活性,基因編輯技術中的AE和CE點編輯系統,就是基於Cas蛋白與APOBEC蛋白各自的功能實現的。兩者分子大小相差極大但功能互不影響,就是因為各自的功能結構域折疊比較穩定,且無蛋白質間相互作用。如果融合標簽與目標蛋白也滿足這種關系,基本是不用去除標簽的,不過這種影響是不可預料的,可以參考相關文獻或者做預實驗確定。
常用的去除蛋白標簽的蛋白酶,及其識別序列如下表。

[1] Protein tag[維基網路], https://en.wikipedia.org/wiki/Protein_tag
[2] Kimple M E, Brill A L, Pasker R L. Overview of affinity tags for protein purification[J]. Current protocols in protein science, 2013, 73(1): 9.9. 1-9.9. 23.
[3] Marintcheva, B. Viral Tools for Protein Expression and Purification. Harnessing the Power of Viruses, 2018, 103–131.
[4] Terpe, K. Overview of tag protein fusions: From molecular and biochemical fundamentals to commercial systems. Appl. Microbiol. Biotechnol., 2002, 60: 523–33.
[5] Nilsson, J. et al. (1997) Affinity fusion strategies for detection, purification, and immobilization of recombinant proteins. Protein Expr. Purif., 1997, 11: 1–16.
[6] Malhotra A. Tagging for protein expression[M]//Methods in enzymology. Academic Press, 2009, 463: 239-258.

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導演:長澤剛、泉明宏、上田繁、廣島秀樹、大庭秀昭、米田光宏、藤本義孝
編劇:子安秀明
主演:小野友樹、島袋美由利、鈴木繪理、高橋李依、加隈亞衣、小倉唯、原田彩楓、春野杏、小松未可子、日笠陽子
類型:喜劇、動畫
製片國家/地區:日本
語言:日語
首播:2018-07-14(日本)
集數:12
單集片長:24分鍾
又名:搖曳庄的幽奈小姐
冬空凩(小野友樹配音)自幼就有著比一般人強烈的靈感力,常常會遭到幽靈的附身,人生因此一直都不是很順利,甚至因此而背負上了巨額的債務。無奈之下,冬空凩只得到處尋找容身之處,就這樣來到了名為搖曳庄的溫泉旅館之中。
雖然搖曳庄的所有住客都是女性,但冬空凩最終還是在這里找到了落腳之地。天真可愛的地縛靈湯之花幽奈(島袋美由利配音)、每天都沉浸在妄想之中的美少女偶像宮崎千紗希(鈴木繪理配音)、對妖怪感到深惡痛絕的靈能忍者高橋李依(高橋李依配音)、酒吞童子的後裔荒霸吐吞子(加隈亞衣配音),和冬空凩住在同一屋檐下的是這些奇奇怪怪的美少女們。

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《堅持住》是由全季洙執導,千玗嬉、劉太旿、鄭在光主演的韓國電影,2019年10月16日在韓國上映

❿ 酵母硒在蛋雞中的作用

硒在家禽日糧中具有重要的作用,參與多種功能的發揮。在蛋雞中大量的研究已經證明相比於無機硒,酵母硒具有更好的生物學利用率且能夠改善產蛋性能和蛋品質。酵母硒對蛋雞的性能改善主要與其有效參與機體抗氧化系統、提高機體免疫力和改善輸卵管健康密切相關。本文結合近些年來在蛋雞中硒的研究,對其功能進行了綜述。

關鍵詞:酵母硒,產蛋性能,蛋品質,抗氧化,免疫力,輸卵管

硒最早是1817年被瑞典化學家貝爾采利烏斯發現的,但是直到20世紀50年代法國科學家才首次發現硒對肝臟有保護作用。在過去的幾十年間,人們對硒進行了大量的研究。而在家禽中,硒主要以硒代蛋氨酸的形式參與到蛋白質中形成硒蛋白,另外有一部分是以硒代半胱氨酸進入體內參與體蛋白組成,發揮廣泛的作用。迄今為止已知的硒蛋白有100多種,在機體中發揮著重要的作用。

有機硒在蛋雞中的應用效果

目前家禽日糧中常用的硒源主要有兩種,即無機硒和有機硒,其中無機硒主要包括了硒酸鈉和亞硒酸鈉,有機硒主要是酵母硒等。大量的研究發現在蛋雞日糧中添加有機硒能夠改善蛋雞的生產性能、蛋品質等。楊玉等(2018)研究發現在老齡蛋雞日糧中添加酵母硒(賽樂硒,奧特奇)8周後能夠顯著提高產蛋率並降低料蛋比(表1)。其中添加0.2ppm的酵母硒就能提高產蛋率8.3%,料蛋比改善5.2%。而在試驗的第14天就觀察到添加酵母硒能顯著提高蛋白高度,同時提高了哈氏單位(圖1),表明酵母硒能夠改善雞蛋的新鮮度,從而發揮延長貨架期的功效。除了對內部品質有改善外,酵母硒的使用還能顯著提高試驗第42天的蛋殼強度並且有效的在蛋黃內富集(圖2)。而酵母硒能發揮改善生產性能、蛋品質等作用主要與以下幾個功能密不可分。

表1:飼糧中添加酵母硒對產蛋後期蛋雞生產性能的影響

圖3:在蛋雞日糧中添加不同水平的酵母硒對肝臟GSH-Px1和Trxr1mRNA相對表達量的影響

酵母硒提高機體免疫力

硒蛋白除了參與機體抗氧化功能的發揮外,同時也在免疫系統中發揮重要的作用。Leng等人(2003)選用220隻1日齡伊莎褐蛋雞進行了為期7周試驗,主要比較了酵母硒和無機硒對育雛期蛋雞免疫系統發育的影響。結果發現添加同等水平(0.2ppm)的酵母硒能夠顯著提高心臟、肺、肌胃、脾臟和腎臟中硒的沉積,並且隨著酵母硒添加量的提高其沉積量進一步增加。進一步比較對十二指腸、法氏囊和盲腸扁桃體中相關免疫細胞水平,結果發現與無機硒相比,添加酵母硒能夠顯著提高第1周十二指腸CD3+細胞的數量,有提高第4周法氏囊CD4+細胞和第7周十二指腸CD8+細胞的趨勢(圖4)。而蛋雞免疫系統的發育主要在前6周,前期免疫系統的建立將有益於機體抵抗各種病原菌的入侵,減少疾病的發生。在產蛋期更好的自身免疫力也意味著更好的養分能夠用於雞蛋的沉積。保證雞群的健康才能保證整體的生產性能。

圖4:育雛蛋雞日糧中添加酵母硒對免疫細胞的影響

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