pet32a載體trx標簽免疫原
⑴ pet32的促溶標簽多大
pet32的促溶標簽32X19mm。
尺寸：寬32*高19MM)左下角白色小標簽為本產品目前市面上的液晶屏幕保護貼，通透度達99%。
pET-32C質粒是一個大腸桿菌表達載體，T7啟動子驅動TrxA促溶標簽和目的蛋白融合表達，PET具有較好硬脆性,可以耐一定的高溫,抵禦惡劣的環境,防酸鹼等化學品的腐蝕,非常適用於戶外和較高品質要求的標簽。
⑵ 用pET-32a表達含起始密碼子的目的蛋白時，翻譯是從載體上的起始密碼子開始還是從目的蛋白上的開始
當然是從載體上已有的融合蛋白開始，你的目的蛋白是在Trx和His-tag後面的
⑶ pet-32a空載體是可溶性表達嗎
該空載體緊緊會表達一段Trx標簽蛋白，加上his標簽，約20kd左右，是高度可溶的。
⑷ 用pet-32a做載體，自己本身的序列有44kda，表達的蛋白應該多大
用pet-32a做載體，自己本身的序列有44kda，表達的蛋白應該多大
1)噬菌體DE3溶源化的菌株如BL21(DE3)是最常用的表達菌株，噬菌體DE3是λ噬菌體的衍生株，構建好的表達載體可以直接轉入表達菌株中，誘導蛋白的表達方式與lac啟動子一樣都是iptg誘導。
2)表達菌株BL21(DE3)上帶有lacI基因，T7 RNA 聚合酶編碼基因以及lacUV5啟動子，lacUV5啟動子可以啟動T7 RNA 聚合酶的表達;
3)表達質粒如pET-28質粒帶有T7啟動子和編碼阻遏蛋白lacI的基因，在插入目的基因後，lacI是失活的;
⑸ 質粒圖譜怎麼看
1.第一步，看箭頭：
大多數質粒都會有箭頭，箭頭有兩種解釋。一種是轉錄方向，轉錄方向主要是由啟動子開始的一個大箭頭，是啟動子啟動序列的順序。另一種是復制起始位點的方向，復制起始位點就是該質粒在大腸桿菌等細菌或真菌中DNA復制的一個方向。
還需要提到的是F1啟動子（圖上的f1 ori）代表的是噬菌體的復制起始方向，只能復制出單鏈的DNA哦，但是可以用來測序。看懂轉錄的方向，這樣就方便設計插入片段的位置和方向性。
2.第二步，看上面的標簽。
報告基因：通常會有一兩個蛋白，被用作報告基因，比如常見的copGFP（綠色熒光蛋白），Puro（嘌呤黴素），Lacz（乳糖操縱子）等等。和抗性基因不同，這樣的報告基因，並不是為了在大腸桿菌擴增質粒的過程中起作用的。
而是在質粒轉入表達體系後起到作用的，基本上就是為了顯示過表達或是敲減的基因是否正常運作。有的報告基因會融合在蛋白中表達，有的會另外用一個獨立的啟動子進行表達（比如shRNA的質粒中）。
3.第三步，看多克隆位點：
MCS（Multiple Cloning Site，也就是多克隆位點），一般圖中會把多克隆位點上的酶切位點都標記出來。上面的酶切位點順序，一般都是按照5`-3`的順序排列下來的，需要注意的是這樣幾點。
第一點是要注意，酶切位點邊標注了*的一般是指並不僅僅存在一個位點，也就不能用來作為構建質粒的酶切位點。
第二點需要注意的是，有的酶切位點，在序列中只有一個，但它上面也會標注一個*或者（dam），這說明可能這個酶切位點會有CpG島的甲基化修飾[常見的是XbaI，TCTAG(6m)A中的TC無法切開]，一般也是不能用的。但是非要用這個酶切位點的話，就需要用非甲基化的感受態細胞，如JM109或者JM110。
4.第四步，看多克隆位點的序列：
末端如果有差異的話，可以把基因的ATG（甲硫氨酸）的5`末端替換1-2個鹼基（變成GTG或者GCG這樣），從第二個氨基酸序列開始完全一致即可。而配合擴增和酶切的話，插入片段是允許有3`末端的冗餘。
為了可以應付3`末端的冗餘鹼基，在多克隆位點序列後，會有解碼的終止TAA密碼，即使插入的片段使得3`末端產生了移碼突變，照樣能使表達的蛋白正常終止掉（在酵母雙雜的AD質粒中，由於插入的是隨機cDNA，所以AD的載體上會常見這樣的結構）。
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分類
1.根據質粒能否通過細菌的接合作用，可分為接合性質粒和非接合性質粒。
接合性質粒帶有與接合傳遞有關的基因。非接合質粒在一定條件下通過與其共存的接合質粒的誘動或轉導而傳遞。
2.根據質粒在細菌內的復制類型可分為兩類：嚴緊控制型和鬆弛控制型。
嚴緊控制復制型質粒的復制酶系與染色體DNA復制共用，只能在細胞周期的一定階段進行復制，當細胞染色體停止復制時，質粒也就不再復制。
鬆弛控制復制型的質粒的復制酶系不受染色體DNA復制酶系的影響，在整個細胞生長周期中隨時都可以復制，在染色體復制已經停止時質粒仍能繼續復制。
3.根據質粒的不相容性，可分為不相容性和相容性。
不相容性指結構相似、密切相關的質粒不能穩定地共存於同一宿主細菌內的現象，反之為相容性。常用於流行病學的調查。
⑹ pET-32a攜帶標簽大小究竟是多少
很簡單，pet32a表達的是6*his標簽的蛋白，你表達的基因如果有x個氨基酸，則蛋白大小約為(x+6)*110/1000kd。
⑺ pet-32a載體在進行原核表達的時候與目的基因連接時不需要酶切嗎
需要啊，首先載體與目的基因酶切後，再用T4DNA連接酶連接起來，然後轉化感受態
⑻ 如何計算融合蛋白的大小在PET-32a載體里表達後
很簡單，pET32a表達的是6*HIS標簽的蛋白，你表達的基因如果有x個氨基酸，則蛋白大小約為(x+6)*110/1000KD。
⑼ 您好，我看您在表達載體這一塊懂的比較多，我想請教您我構建PET32a表達載體，但是沒有辦法表達，求原因
首先分析測序結果是否正確，融合表達有沒有同框，其次分析是沒有表達還是表達較弱，可以採用Western檢測目標蛋白或者檢測標簽，如果是弱表達的話就需要優化表達條件。還有就是你構建的載體有沒有轉化進入表達宿主細胞，同時也要考慮密碼子偏好性的問題。
⑽ pet32a是什麼原理
就是質粒的原理