trx标签蛋白

『壹』 trx标签蛋白大小

11.6kDa。
trx标签的硫氧还蛋白A又叫TrxA，分量为11.6kDa，来源于大肠杆菌。
TrxA标签最独特的优点是它的热稳定性。

『贰』 6×his标签结合蛋白分离纯化时用不用切掉

分离纯化时是否需要切除his标签要看标签是否会影响到蛋白的活性。一般情况下6xhis是一个非常小的标签，不会对蛋白整体的结构和活性有太大影响，如果是加了Trx的His标签可能会需要切除掉。

『叁』 pET-32a携带标签大小究竟是多少

很简单，pet32a表达的是6*his标签的蛋白，你表达的基因如果有x个氨基酸，则蛋白大小约为(x+6)*110/1000kd。

『肆』 trx是什么意思

trx悬挂训练;硫氧化还原蛋白;硫氧还蛋白;蛋白;收发信机。

Trx has various biological functions in keeping stable redox status of cells.

硫氧还蛋白具有多种生物学功能，对维持体内稳定的氧化还原状态具有重要的作用。

Construction of recombinant adenovirus vector with TRX gene by Tet-Off inction.

Tet-Off诱导的硫氧还蛋白基因重组腺病毒载体的构建。

These studies have shown that: TRX can suppress tumor cell apoptosis.

研究表明：TRX可以抑制肿瘤细胞凋亡。

Trx plays crucial roles in regulating cell growth, apoptosis and gene transcription.

Trx具有调节细胞生长、抑制凋亡、调节基因转录等功能。

CONCLUSION: TRX protein plays an important role in the defense response of myocardium against oxidative stress.

结论：TRX蛋白在心肌的氧化应激防御反应中起重要作用。

『伍』 带有trx标签会不会影响蛋白的抗原性

有可能的
trx标签是比较大的融合标签，有20多KDa
非常有可能改变蛋白的抗原决定簇
一般为了不影响蛋白的功能，会在trx标签和目标蛋白之间加一个酶切位点，比如肠激酶的位点DDDDK，把trx标签去除掉

『陆』 TRX标签蛋白怎么纯化

一般这个载体中都会有His 标签，直接用镍柱纯化即可

『柒』 蛋白的表达与纯化

蛋白表达纯化已经是非常经典简单的实验了，没有LSS说的那么吓人。
说说我的蛋白表达纯化以及下面的单抗制作工作总体设计概要吧：

1 首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列，查阅相关文献，看目的基因在那些细胞或者组织中高表达，进而设计该基因的引物，扩增出目的DNA片段的ARF。这一布叫目的基因片段的获取

2 构建表达载体：根据你获得的基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达，这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒，导入表达系统中。一般原核表达时间短，成本低，表达量大，常优先考虑；但是有些基因在E coli中就是表达不出，可能是密码子优化等出现问题，也或者是由于想纯化得到更好的活性蛋白的考虑（原核的蛋白折叠系统显然没有真核的好），有很多研究者选择在毕赤酵母中表达。（我手里就有相关资料，因为以前做过表达纯化及后来的单抗制备），这一步再强调一下，优化密码子对于蛋白的成功表达很重要

3 载体构建好了，下面就是重组蛋白的表达了。这一过程涉及到用多少的诱导剂，诱导多少时间才能得到最多的蛋白的问题，即优化表达条件。就是在上述不同量诱导剂诱导条件下，取菌体上清（分泌型）或者破碎细胞（胞内表达的蛋白）电泳，看是否得到目的分子量大小的蛋白

4 蛋白表达成功，下面是根据蛋白质本身亲水/疏水，电荷带电特性等确定蛋白纯化的方法。一般步骤：离心，取蛋白所在的相
如果是分泌表达的蛋白，则取上清，超滤，没有超滤仪器可以用透析袋等代替，用离子交换柱层析。基本上这一步能得到纯化的95％的蛋白，电泳鉴定基本不会看到有杂带出现。如果还是纯度不符合要求，可以在表达蛋白最初在构建表达载体质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS－标签，这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化，在不确定自己的融合蛋白是否有表达的时候，也可以单单用抗HIS的抗体做一WB，分析确认目的蛋白是否表达，这是蛋白表达的常用手段。

5 经过纯化后的蛋白仍然含有一部分无机盐，如果需要的话可以将蛋白经真空冻干机冻干，得到纯蛋白。

我们实验室做出来的一个蛋白，编码序列GC含量高75达％，但是功夫不负有心人，只要你想做那件事情，积极的寻找解决问题的手段，总会搞定的，没有跨不过的坎。如果坎太宽，搭桥解决总行。

『捌』 重组蛋白的组氨酸标签 怎么去掉

6xHis标签可用一些酶，譬如TAGZyme去除

『玖』 pet-32a空载体是可溶性表达吗

该空载体紧紧会表达一段Trx标签蛋白，加上his标签，约20kd左右，是高度可溶的。

『拾』 pet32a切除标签

这个我刚好做过，用肠激酶切除~~用Ni-NTA镍柱纯化，你给我个邮箱，方法我发给你