trx标签融化蛋白

❶ 6×his标签结合蛋白分离纯化时用不用切掉

分离纯化时是否需要切除his标签要看标签是否会影响到蛋白的活性。一般情况下6xhis是一个非常小的标签，不会对蛋白整体的结构和活性有太大影响，如果是加了Trx的His标签可能会需要切除掉。

❷ pet-32a空载体是可溶性表达吗

该空载体紧紧会表达一段Trx标签蛋白，加上his标签，约20kd左右，是高度可溶的。

❸ 蛋白的表达与纯化

蛋白表达纯化已经是非常经典简单的实验了，没有LSS说的那么吓人。
说说我的蛋白表达纯化以及下面的单抗制作工作总体设计概要吧：

1 首先要知道你要纯化蛋白的编码DNA序列，查阅相关文献，看目的基因在那些细胞或者组织中高表达，进而设计该基因的引物，扩增出目的DNA片段的ARF。这一布叫目的基因片段的获取

2 构建表达载体：根据你获得的基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达，这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒，导入表达系统中。一般原核表达时间短，成本低，表达量大，常优先考虑；但是有些基因在E coli中就是表达不出，可能是密码子优化等出现问题，也或者是由于想纯化得到更好的活性蛋白的考虑（原核的蛋白折叠系统显然没有真核的好），有很多研究者选择在毕赤酵母中表达。（我手里就有相关资料，因为以前做过表达纯化及后来的单抗制备），这一步再强调一下，优化密码子对于蛋白的成功表达很重要

3 载体构建好了，下面就是重组蛋白的表达了。这一过程涉及到用多少的诱导剂，诱导多少时间才能得到最多的蛋白的问题，即优化表达条件。就是在上述不同量诱导剂诱导条件下，取菌体上清（分泌型）或者破碎细胞（胞内表达的蛋白）电泳，看是否得到目的分子量大小的蛋白

4 蛋白表达成功，下面是根据蛋白质本身亲水/疏水，电荷带电特性等确定蛋白纯化的方法。一般步骤：离心，取蛋白所在的相
如果是分泌表达的蛋白，则取上清，超滤，没有超滤仪器可以用透析袋等代替，用离子交换柱层析。基本上这一步能得到纯化的95％的蛋白，电泳鉴定基本不会看到有杂带出现。如果还是纯度不符合要求，可以在表达蛋白最初在构建表达载体质粒的时候在蛋白的ORF后面加上HIS－标签，这样得到的蛋白不但可以用于HIS柱的进一步纯化，在不确定自己的融合蛋白是否有表达的时候，也可以单单用抗HIS的抗体做一WB，分析确认目的蛋白是否表达，这是蛋白表达的常用手段。

5 经过纯化后的蛋白仍然含有一部分无机盐，如果需要的话可以将蛋白经真空冻干机冻干，得到纯蛋白。

我们实验室做出来的一个蛋白，编码序列GC含量高75达％，但是功夫不负有心人，只要你想做那件事情，积极的寻找解决问题的手段，总会搞定的，没有跨不过的坎。如果坎太宽，搭桥解决总行。

❹ trx是什么意思

trx悬挂训练;硫氧化还原蛋白;硫氧还蛋白;蛋白;收发信机。

Trx has various biological functions in keeping stable redox status of cells.

硫氧还蛋白具有多种生物学功能，对维持体内稳定的氧化还原状态具有重要的作用。

Construction of recombinant adenovirus vector with TRX gene by Tet-Off inction.

Tet-Off诱导的硫氧还蛋白基因重组腺病毒载体的构建。

These studies have shown that: TRX can suppress tumor cell apoptosis.

研究表明：TRX可以抑制肿瘤细胞凋亡。

Trx plays crucial roles in regulating cell growth, apoptosis and gene transcription.

Trx具有调节细胞生长、抑制凋亡、调节基因转录等功能。

CONCLUSION: TRX protein plays an important role in the defense response of myocardium against oxidative stress.

结论：TRX蛋白在心肌的氧化应激防御反应中起重要作用。

❺ 两个his标签表达出来后，为什么跟预测的大小相差很

xiewen83(站内联系TA)我也不知道，学习一下！zysshine(站内联系TA)6个组氨酸和19KD左右的硫氧还蛋白再加上你的 目的蛋白sin_007(站内联系TA)载体上有Trx.Tag , His.Tag , S.Tag。 trx-tag 有12KD，2个HIS标签，每个有0.8KD，若你所表达序列有终止密码子的话，只表达一个his标签，s-tag有1.7KD，再加上你的目的序列所表达出来的蛋白就融合蛋白的总大小。muchong5577(站内联系TA)有文献报道：加了his标签的表达蛋白在sds的时候分子大小会产生偏差。wordsworth3180(站内联系TA)我跑电泳看到的载体蛋白大概有16-17kdly888lsp(站内联系TA)6个组氨酸和19KD左右的硫氧还蛋白再加上目的蛋白DDDD

❻ 女生怎么通过trx训练来瘦身塑身

四种科学减肥法让效果翻倍

大家都知道减脂需要做到消耗的能量大于摄入的能量。而成年人能量需求取决于三个因素：基础代谢率，饮食生热作用和身体活动。今天我们就来说说基础代谢率。
基础代谢是指人体在清醒、静卧、空腹和摄氏20度的环境条件下的能量代谢，基础代谢率是单位时间内维持最基本的生命活动所消耗的最低限度的能量，这种能量消耗是相当恒定的。
Tips1：基础代谢是人体在基础状态下的能量代谢。而单位时间内的基础代谢，称为基础代谢率(BMR)。
基础代谢率占了总能量消耗的最大比例，大约为每日能量消耗的60%~75%。它是维持身体正常功能，例如呼吸、心脏功能和体温调节所需要的能量值。增加基础代谢率的因素包括净组织的增加、年轻、体温异常、月经周期和甲亢腺技能亢进。降低基础代谢率的因素包括低热量的摄取、净组织的流失与甲状腺机能的不足。除此之外，代谢功能在遗传方面的差异可达到10%~20%(这也是为什么有的人吃不胖的原因之一)。
Tips2：基础代谢率占总能量消耗的最大比例。
下面列举一些影响能量代谢的因素：
1、肌肉运动
肌肉运动对能量代谢的影响非常显著。肌肉活动的程度称之为肌肉工作的强度，也就是通常所说的劳动强度或体力活动。劳动强度与耗氧量成正比，因此能量代谢值可作为评价劳动强度的指标。
2、精神活动
机体的精神活动处于紧张状态时，如烦恼、恐惧或强烈的情绪激动等均能引起无意识的骨骼肌的紧张性增强和促进代谢的内分泌激素如肾上腺素释放增多，从而使能量代谢显著增高。
3、食物的特殊动力作用
食物特殊动力作用即指因为摄食过程引起的热能消耗。实验证明摄食可使热能代谢增高。各种营养物质的食物特殊动力作用有所不同，摄入糖时耗热量相当于糖本身所产热量的5%～6%，脂肪为4%～5%，蛋白质为30%左右。我国一般膳食的食物特殊动力作用的热能消耗，为膳食热量的10%左右。
4、环境温度
人体安静时能量代谢在20～30℃的环境中最为稳定。当环境温度低于20 时，代谢率即开始增加，当环境降为10℃以下，能量代谢便显著增加，主要是由于寒冷刺激反射引起肌肉紧张度增加、寒战所致。当环境温度为30～45℃时，能量代谢也会增加，这是由于体内酶的活性增加，化学反应速度加快，发汗机能旺盛及循环、呼吸机能增强的缘故。
Tips3：肌肉运动，精神活动，食物特殊动力作用以及环境温度都会对能量代谢产生影响。
下面列举一些影响基础代谢率的因素
1、体型
一般来说，体重相近的普通人中，瘦高的人与矮胖的人相比，前者的基础代谢率高于后者，这跟人体中瘦体质所占比例有关，较多的脂肪组织在代谢中相对耗热量低于瘦体质。
2、年龄
在人的一生中，婴幼儿阶段是整个代谢最活跃的阶段，其中包括基础代谢率，初生婴幼儿生长发育快，基础代谢率高，随着年龄的增长基础代谢率逐渐下降。成年以后基础代谢率每隔10 年约降低2%。一般成人比儿童明显低，老年人又低于成年人。
3、性别
实际测定表明，在同一年龄、同一体表面积的情况下，女性基础代谢率低于男性。通常情况下，女性比男性基础代谢率约低5%～10%，甚至在相同身高体重的情况下也是如此。因为女性的瘦体质所占比例低于男性，妇女孕期基础代谢率明显增加，其增加率可达28%左右，与胎盘、子宫、胎儿发育、呼吸、心跳耗热增加有关。
4、激素
激素对细胞的代谢及调节都有很大影响。许多腺体分泌的激素对细胞代谢起调节作用，如甲状腺、肾上腺等。当甲状腺功能亢进可使基础代谢率明显升高；相反，患粘液水肿时，基础代谢率低于正常水平。当肾上腺皮质和脑垂体的机能低下时，基础代谢率降低。也就是说，内分泌异常时可以影响基础代谢率。
5、气温
炎热地带居民基础代谢率一般较低，一般热带居民比温带同类居民基础代谢率约低10%。反之，严寒地区基础代谢率比温带高10%。通常情况下，寒冷的冬季明显高于炎热的夏季，在季节上，存在明显的差异性。
6、体表面积
基础代谢率的高低与体重并不成比例关系，而与体表面积基本成正比。因此，生理学上，通常用平方米体表面积为标准来衡量能量代谢率，这是比较合适的。
Tips4：体型，年龄，性别，激素，气温以及体表面积都会对基础代谢率产生影响。
正是因为基础代谢的问题，你们才更需要通过科学的方式进行减脂，保证以一个健康的身体迎接理想的体型。
为了夏天能够展示完美身材陆陆续续进入了减脂期，对于任何一位减脂的女性而言，除了训练和饮食外，还有很多你需要注意的地方。对于减脂要有一个更全面的认识，合理的安排饮食和训练，使你事半功倍。

❼ TRX标签蛋白怎么纯化

一般这个载体中都会有His 标签，直接用镍柱纯化即可

❽ 带有trx标签会不会影响蛋白的抗原性

有可能的
trx标签是比较大的融合标签，有20多KDa
非常有可能改变蛋白的抗原决定簇
一般为了不影响蛋白的功能，会在trx标签和目标蛋白之间加一个酶切位点，比如肠激酶的位点DDDDK，把trx标签去除掉

❾ 重组蛋白的组氨酸标签 怎么去掉

6xHis标签可用一些酶，譬如TAGZyme去除