trx标签蛋白酶切后易沉淀

① 蛋白质溶液加热煮沸为什么能引起蛋白质沉淀

蛋白质变性，形成溶质微粒大于100纳米的粘结块

② 带有trx标签会不会影响蛋白的抗原性

有可能的
trx标签是比较大的融合标签，有20多KDa
非常有可能改变蛋白的抗原决定簇
一般为了不影响蛋白的功能，会在trx标签和目标蛋白之间加一个酶切位点，比如肠激酶的位点DDDDK，把trx标签去除掉

③ 为什么说“变性的蛋白质一定沉淀”这句话是错的

天然蛋白质分子受到某些物理因素如热、紫外线照射、高压和表面张力等或化学因扮槐素如有机溶剂、酸碱等的影响时，生物活性丧失，溶解度降低，不对称性增高以及其他的物理化学常数发生改变，这种过程称为蛋白质变性。蛋白质变性后，会引起一些物理化学性质的改变，疏水基外厅缓友露，溶解度降低，一般在等电点区域不溶解，分子相互凝集，形成沉淀。但在碱性溶液中，或有尿素、盐酸胍等变性剂存在时，仍保持溶解状态，透析除去这些变性剂时，又可哪银沉淀出来。

④ 酶切后沉淀的方法

最好是采用切胶回收，使用胶回收试剂盒很方便的。
如果没有试剂盒也可以用等体积酚氯仿抽提，再加顷手入十分之一链圆体积3M
NaAc（pH5.2），2.5倍体棚乎塌积无水乙醇，－20度沉淀过夜，12000rmp离心后用70％乙醇洗涤后加TE溶解。

⑤ GST标签蛋白的纯化，目的蛋白在GST标签切除后的浓缩、纯化（离子交换和分子筛）过程中出现了聚集和降解。

肯定是很纯了再切除啊，加gst标签的目的就是为了纯化。纯化后切除，然后再纯化一次就行了。你是蛋白酶把目的蛋白也切了吧？不然怎谈袜么喊侍桥会变性呢？检郑猛查一下蛋白酶切位点